[发明专利]一种辣木组织培养中的种子消毒方法

说明书

技术领域

本发明属于组织培养领域，具体为一种辣木组织培养中的种子（预处理）消毒方法。

背景技术

辣木为辣木科辣木属植物，富含蛋白质、钙、铁、钾、Va、Vc等多种营养元素。辣木不仅可以食用，而且在医疗保健方面也有广泛应用。随着辣木功能的不断开发，辣木的种植规模也在不断扩大。

随着植物组织培养技术越来越成熟，现已被应用到多种植物中进行快速繁殖。在植物组织培养中，获得无菌苗是试验成功的第一步，而无菌苗一般是通过种子获得的，因此，种子的有效消毒方法显得尤为重要。

目前，在辣木组织培养中关于辣木种子的消毒方法已有报道（罗云霞 等，2007），但其消毒方法较繁琐，耗时较长，增加了对种子的毒害性。

发明内容

针对上述技术的不足，本发明提供了一种辣木组织培养中的种子消毒方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种辣木组织培养中的种子消毒方法，其特征在于：种子消毒前，将种子的纸质羽翼以及褐色外壳去除，然后利用75%的酒精和0.1%的升汞进行消毒处理。

本方法包括如下步骤：

（1）    选择籽粒饱满的辣木种子，将纸质羽翼和褐色外壳去除；

（2）    用无菌水冲洗；

（3）    用75%的酒精消毒；

（4）    用0.1%的升汞消毒；

（5）    最后用无菌水冲洗完成消毒步骤。

步骤（2）中用无菌水冲洗1-2次。

步骤（3）中酒精消毒时间为30s。

步骤（4）中加入1-2滴吐温-20 。

步骤（4）中用0.1%的升汞消毒的时间为7-15min， 以10min为优。

步骤（5）中用无菌水冲洗5-6次。

在辣木组织培养中，现有的种子消毒方法，种子需经过流水冲洗、浸泡等步骤，而且消毒剂消毒处理时间较长；本发明中种子无需经过流水冲洗、浸泡等步骤，从而缩短了种子处理时间，同时在消毒剂消毒处理时消毒时间缩短，降低了消毒剂对种子的毒害作用。本发明所述方法与现有的辣木组织培养中的种子消毒方法相比，具有种子处理时间短、消毒时间短、污染率小、萌发率高的优点，保证了较高的出苗率。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步说明，但本发明并不局限于此。本实施例均以购自厦门天竺实业有限公司的辣木种子为试验材料。

应用实施例一

本实施例采用三种处理方式对种子进行预处理，并进行了0.1%的升汞消毒时间对辣木种子消毒效果的影响研究。

一、辣木种子预处理方法设计：                                               种子去除纸质羽翼；种子去除纸质羽翼和褐色外壳；未经处理的种子。

种子消毒方法：每个处理100粒种子，在超净工作台上用无菌水冲洗2次，然后用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒10min（加入2滴吐温-20），最后用无菌水冲洗5-6遍，接种于MS培养基。

二、0.1%的升汞消毒时间对辣木种子消毒效果的影响

辣木种子消毒时间设计：0.1%的升汞消毒7min；0.1%的升汞消毒10min；0.1%的升汞消毒15min。

种子消毒方法：每个处理100粒种子，将去除纸质羽翼和褐色外壳的种子在超净工作台上用无菌水冲洗2次，然后用75%的酒精消毒30s，再用0.1%的升汞消毒处理（加入2滴吐温-20），最后用无菌水冲洗5-6遍，接种于MS培养基。

三、辣木无菌苗培养

将消毒处理后的辣木种子，接种于MS培养基上，置于培养室中培养，培养温度（25±2）℃，光照强度1500-2000lx，光照时间12h/d。

培养3天后观察种子的消毒效果，培养15天时观察统计种子的污染率、发芽率。

结果与分析如下：

表1 种子预处理方法对辣木种子发芽及消毒效果的影响

由表1可知，处理2的发芽率为86%、污染率为0%，明显优于处理1、3，由此可知处理2的预处理方法对种子的消毒效果有积极作用，是实现高发芽率、低污染率较理想的方法。

表2 消毒时间对辣木种子发芽及消毒效果的影响