[发明专利]一种检测生物滤床对胞外微囊藻毒素降解潜能的方法

权利要求书

1.一种检测生物滤床对胞外微囊藻毒素降解潜能的方法，其特征在于，是通过实时荧光定量PCR方法检测生物滤床基质中的微囊藻毒素降解菌的丰度，从而间接评估生物滤床对微囊藻毒素的降解能力，步骤如下：

S1.采集生物滤床表层的基质；

S2.震荡过滤提取基质生物膜上的微生物；

S3.快速提取微生物的DNA；

S4.通过实时荧光定量PCR检测微囊藻毒素降解菌基因mlrA的拷贝数；

S5.通过mlrA及微囊藻毒素降解效率间的关系曲线评估生物滤床对微囊藻毒素的降解能力。

2.根据权利要求1所述检测生物滤床对胞外微囊藻毒素降解潜能的方法，其特征在于，具体操作步骤如下：

S1.生物滤床基质样品采集与处理：采集生物滤床表层1.0～5.0cm处的基质，使用TE缓冲液震荡清洗2次，取悬浊液；

S2.过滤：将S1得到的悬浊液依次用孔径1.0μm的玻璃纤维滤膜A和孔径0.22μm的玻璃纤维微孔滤膜B进行过滤；

S3.样品DNA提取：将含有样品的滤膜B轻轻塞进含有玻璃珠的离心管中，用液氮反复冻融后，进行DNA提取；

S4.实时荧光定量PCR反应：以提取的样品DNA为模板，用引物qmlrAf 和qmlrAr进行实时荧光定量PCR反应，所述引物qmlrAf和qmlrAr的序列分别如SEQ ID NO.1～2所示；

S5.根据实时荧光定量PCR反应得到的拷贝数来判断生物滤床对胞外微囊藻毒素的降解潜能。

3.根据权利要求1或2所述检测生物滤床对胞外微囊藻毒素降解潜能的方法，其特征在于，步骤如下：

S1.生物滤床基质样品采集与处理

S11.采集生物滤床表层1.0～5.0cm处的基质10～30g，加入到已添加100～200mL TE缓冲液的玻璃瓶中，28℃，280r/min震荡15～30min后，取悬浊液；

S12.向S11剩余基质中添加50～100mL TE buffer，震荡15min，取悬浊液；

S2.过滤：

S21.将S1处理后得到的所有悬浊液用孔径1.0μm的玻璃纤维滤膜A进行过滤，滤膜A再经ddH₂O冲洗3～5次并抽滤干净；

S22.收集S21的滤液，再次经孔径0.22μm的玻璃纤维微孔滤膜B过滤；

S3.样品DNA提取：将含有样品的滤膜B轻轻塞进离心管中，并用液氮反复冻融3～5次，回温后再将滤膜塞进含玻璃珠的离心管中，添加提取缓冲液，涡旋5min，进行DNA提取；

S4.实时荧光定量PCR反应：以提取的样品DNA为模板，用引物qmlrAf 和qmlrAr进行实时荧光定量PCR反应，所述引物qmlrAf和qmlrAr的序列分别如SEQ ID NO.1～2所示；

S5.根据实时荧光定量PCR反应得到的拷贝数来判断生物滤床对胞外微囊藻毒素的降解潜能。

4.根据权利要求2或3所述检测生物滤床对胞外微囊藻毒素降解潜能的方法，其特征在于，步骤S1是在生物滤床表层1.0～3.0cm采集基质，采集量为10～20g；步骤S1所述采集是在基质表层设置4～10个采集点，采集点在基质表层平面上均匀分布，各采集点采集的样品进行混合；所述基质为粒径1.0～3.0cm的火山石、陶粒或沸石。

5.根据权利要求2或3所述检测生物滤床对胞外微囊藻毒素降解潜能的方法，其特征在于，步骤S1所述生物滤床为模块式自然曝气生物滤床，垂直方向共分为5层，上面四层为基质填充层（3），最下面一层为循环进水层（4）；每层均设置采样口（1）；每层模块间为跌水曝气层（2）；（5）为流量控制器；（6）为出水口；（7）为每层底部圆筛出水口；（8）为装置底部布水管；（9）为顶部进水管；

所述基质填充层（3）中的基质为粒径1.0～3.0cm的火山石、陶粒或沸石；

步骤S1所述采集是通过预设采样口（1）从每层基质填充层的表层采集基质，每层基质设置采集点4～10个，采集点在基质表层平面上均匀分布，同一层各采集点采集的样品进行混合。