[发明专利]一种稳定、抗干扰能力强的血清尿素检测方法及试剂

说明书

技术领域

本发明涉及用于临床测定血清中尿素含量的检测方法及试剂，属于临床体外检测技术领域。

背景技术

尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物。尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%，它通过肝脏中的氨进行合成，是蛋白质脱氨作用的产物。通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中，是消除体内多余氮的主要方法。尿素氮的检测用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。

血液尿素水平是肾功能以及肾前状态和肾后状态的度量标准，肾前因素引起的尿素的升高包括心脏代偿失调，缺水或增加的蛋白质分解代谢。水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾纤维化和肾小管坏死。

目前临床实验室测定尿素最常用的方法有二乙酰-肟法，脲酶-波氏比色法，酶偶联速率法。

二乙酰一肟法：尿素可与二乙酰作用，在强酸加热的条件下，生成粉红色的二嗪化合物（Fearom反应），在540nm比色，其颜色强度与尿素含量成正比。二乙酰不稳定，用二乙酰一肟代替，后者遇酸水解成二乙酰。此外，二乙酰一肟与尿素的反应不是专一的，与瓜氨酸也有显色。本法专一性差，线性范围狭窄，且试剂中含有强腐蚀性化学物，易对仪器和环境造成污染，一般临床已很少使用此方法。

脲酶—波氏法：首先用脲酶水解尿素生成氨和二氧化碳。然后，氨在碱性介质中与苯酚及次氯酸反应，生成蓝色的吲哚酚，此过程需用亚硝基氰化钠催化反应。蓝色吲哚酚的生成量与尿素含量成正比，在630nm波长比色测定。该法的缺点在于易受环境中铵根离子的影响造成结果假性偏高，此外脲酶的活性容易受到氟化物的抑制造成结果偏低。

发明内容

本发明提供一种抗干扰能力强、稳定性好的血清尿素检测方法及试剂，该产品包括试剂R1和试剂R2。

试剂R1：

PIPES（哌嗪-1,4-二乙磺酸）缓冲液（pH=7.6）             100mmo1/L

α-酮戊二酸                                             20mmo1/L

谷氨酸脱氢酶                                           800U/L

ADP                                                   2mmo1/L

BSA                                                    1g/L

海藻糖                                                  2g/L

蔗糖                                                    20g/L

APG(烷基糖苷)                                           2g/L

叠氮钠（NaN3）                                         0.5g/L

试剂R2：

PIPES（哌嗪-1,4-二乙磺酸）缓冲液（pH=9.4）              100mmo1/L

脲酶                                                   10KU/L

NADH                                                 1.2mmo1/L 

BSA                                                    1g/L

海藻糖                                                  2g/L

蔗糖                                                    20g/L

APG(烷基糖苷)                                           2g/L

叠氮钠（NaN3）                                         0.5g/L 。

本发明所采用的技术方案是：