[发明专利]用于肉制品中掺假马源性成分快速鉴别的锁核酸探针荧光定量PCR方法及其引物和锁核酸探针序列

权利要求书

1.用于肉制品中掺假马源性成分快速鉴别的锁核酸探针荧光定量PCR的引物序列和探针序列，其特征是所述引物序列包括：

上游引物序列为：5’-CCCACTATCAGGATTCATACCC-3’；

下游引物序列为：5’-AGTGAGGTGGAATAGGTTAGTCG-3’；

所述锁核酸探针序列为：

5’-FAM-ACACCAAAAATAGCAGCATCATCCTCC-BHQ1-3’。

2.用于肉制品掺假马源性成分快速鉴别的锁核酸探针荧光定量PCR方法，其特征在于包括如下步骤：

⑴设计引物和锁核酸探针的序列：

上游引物序列为：5’-CCCACTATCAGGATTCATACCC-3’；

下游引物序列为：5’-AGTGAGGTGGAATAGGTTAGTCG-3’；

锁核酸探针序列为：

5’-FAM-ACACCAAAAATAGCAGCATCATCCTCC-BHQ1-3’；

(2)采用步骤(1)设计的引物和探针建立马源性成分的锁核酸荧光定量PCR检测方法；

其特征在于：锁核酸探针荧光定量PCR检测方法的反应体系为：20μL，包括10μLProbesMaster2×conc，其中包含有dNTP，Mg2+以及Taq酶等，10μmol/L上述上下游引物F/R各0.4μL，10μmol/上述锁核酸探针P0.3μL，DNA模板1μL，超纯水补至20μL；

反应参数：95℃8min；95℃，10s，58℃，30s，收集荧光信号，35～40个循环，

试验设纯马肉DNA阳性对照和空白对照，

阳性对照Ct值≤20，且有明显扩增曲线，空白对照无Ct值，试验有效，可进行结果判定；

样品无Ct值，或Ct_（样品）＞30，或︱Ct_（样品）-Ct_（阳性）︱≤7，且样品有明显扩增曲线，判定为阳性结果，报告样品掺有马源性成分；︱Ct_（样品）-Ct_（阳性）︱＞7，且样品无明显扩增曲线，判定为阴性结果，报告样品无马源性成分；︱Ct_（样品）-Ct_（阳性）︱＞7，且样品扩增曲线明显呈对数增长，判为假阳性，报告样品污染马源性成分。