[发明专利]一种叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于制备肿瘤靶向药物的叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

1）混合溶液的制备：按照叶酸:脱水缩合剂:缩合促进剂=1:1~1.2:1~1.2的摩尔比，将上述反应物加入到无水溶剂中，在室温条件下搅拌至溶解，得到混合溶液；所述脱水缩合剂选自N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐、N,N'-二异丙基碳二亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺中的任意一种；所述缩合促进剂选自N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三氮唑、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑中的任意一种；所述溶剂选自二甲基亚砜、乙醇、甲醇中的任意一种；

2）叶酸的接枝：按照叶酸中的羧基:壳聚糖中的氨基=1:1的摩尔比，将步骤1）中得到的混合溶液缓慢加入到磺酸甜菜碱-壳聚糖水溶液中，在室温、避光条件下搅拌16~24h，得到叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒水溶液；

其中，所述磺酸甜菜碱-壳聚糖通过下法制得：首先，按照1:1:5~6的重量比，将壳聚糖、磺酸甜菜碱和RAFT试剂溶解在含有1%盐酸和丙酮的混合溶液中，惰性气体除氧后密封，暴露在辐射剂量为10Gy/min的⁶⁰Co源下反应15~20h；其次，将反应物置于截留分子量为25000Da的透析袋中，用去离子水透析48~72h，得到留在透析袋中的磺酸甜菜碱-壳聚糖水溶液；最后，将得到的水溶液于-20℃预冻6~8h，然后冷冻干燥36~48h，得到两亲性纳米颗粒磺酸甜菜碱-壳聚糖；

其中：所述壳聚糖的脱乙酰度为95.2%，平均分子量为50000g/mol；所述磺酸甜菜碱为3-[N,N-二甲基-[2-(2-甲基丙-2-烯酰氧基)乙基]铵]丙烷-1-磺酸内盐；所述RAFT试剂为S,S’-二(R,R’-二甲基-R’’-乙酸)三硫代碳酸酯；所述含有1%盐酸和丙酮的混合溶液中1%盐酸和丙酮的体积比为7:3；所述惰性气体选自氮气、氦气、氩气中的任意一种；

3）透析和冻干：将步骤2）中得到的叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒水溶液置于透析袋中，首先用碱液透析12~18h，再用去离子水透析24~48h，将得到的透析液在12000~14000rpm下离心40~60min，最后将上清液冷冻干燥，得到叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中所述叶酸、脱水缩合剂、缩合促进剂之间的摩尔比为1:1:1。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3）中所述透析袋的截留分子量为3500Da；所述碱液选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙中的任意一种的水溶液，其摩尔浓度为0.01mM。

4.根据上述权利要求中任一项所述的制备方法制备的叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒。

5.根据权利要求4所述的叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒在制备肿瘤靶向药物中的应用，所述应用为一种包裹抗肿瘤药物的肿瘤靶向纳米颗粒的制备方法，其包括如下步骤：

A）纳米颗粒预混液的制备：按照1mg叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒:0.5~2ml水的比例，将叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒溶解于水中，搅拌均匀后，得到纳米颗粒预混液；

B）抗肿瘤药物预混液的制备：按照1mg抗肿瘤药物:0.2~1ml有机溶剂的比例，将抗肿瘤药物溶解于有机溶剂中，超声处理后，得到抗肿瘤药物预混液；所述抗肿瘤药物为依托泊苷；

C）混合包裹及冻干：将两种预混液混合并振荡，向混合液中通入惰性气体后，将混合液离心，并将离心后的残留固体冷冻干燥，得到包裹抗肿瘤药物的肿瘤靶向纳米颗粒。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，在步骤A）中，按照1mg叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒:0.5ml水的比例，将叶酸修饰的磺酸甜菜碱-壳聚糖纳米颗粒溶解于水中；所述水选自蒸馏水、去离子水中的任意一种。