[发明专利]一种嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法

权利要求书

1.一种嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：

①首先按照9:1的比例，用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的红细胞裂解液储存液稀释到工作状态；同样地用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的磷酸盐缓冲液的储存液稀释到工作状态；

②按顺序将试验样本编号，并标记好试验所需的流式上样管；

③在每个流式上样管内加入所需的抗体组合：抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DR、抗人CD203c和抗人CD63荧光标记流式抗体组合，如FITC标记的抗人CD123、APC标记的抗人CCR3、APC/Cy7标记的抗人HLA-DR，PE标记的抗人CD203c、PE/Cy7标记的抗人CD63，用量为每人份五种抗体各5μL，以鉴定嗜碱性粒细胞激活和脱颗粒状态；

④患者全血低速漩涡混匀后，用加样枪吸取混合好的25μL至125μL全血加到标记好的流式管内，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3～5s，室温避光孵育15min；

⑤孵育结束后，每个样本管内加入1mL的红细胞裂解液，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3～5s，室温避光孵育10min；

⑥孵育结束后，1200rpm/min转速离心6min，离心结束后，弃去上清液，加入1mL的PBS缓冲液，以同样的速度离心；

⑦离心后，以同样的方式去上清液，加入300μL的PBS缓冲液，用流式细胞仪检测；

⑧用不同流式细胞仪相应的分析软件分析嗜碱性粒细胞的计数及平均荧光强度。

2.根据权利要求1所述的嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法，其特征在于：所述荧光标记流式抗体包括FITC、APC、APC/Cy7、PE、PE/Cy7或PerCP荧光标记的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DR、抗人CD203c和抗人CD63抗体。

3.根据权利要求1所述的嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法，其特征在于：所述抗体组合为任何荧光标记或分子标记的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DR、抗人CD203c、抗人CD63五种抗体组合。

4.根据权利要求1所述的嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法，其特征在于：所述的混合好的25μL至125μL全血为25μL至125μL之间的任何量。

5.根据权利要求1所述的嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法，其特征在于：所述的流式细胞仪分析包括嗜碱性粒细胞的计数及平均荧光强度。

6.一种嗜碱性粒细胞激活的鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：

①首先按照9:1的比例，用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的红细胞裂解液储存液稀释到工作状态；同样地用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的磷酸盐缓冲液的储存液稀释到工作状态；

②按顺序将试验样本编号，并标记好试验所需的流式上样管；

③在每个流式上样管内加入所需的抗体组合：抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DR、抗人CD203c荧光标记流式抗体组合，如FITC标记的抗人CD123、APC标记的抗人CCR3、APC/Cy7标记的抗人HLA-DR，PE标记的抗人CD203c，用量为每人份四种抗体各5μL，以鉴定嗜碱性粒细胞激活状态；

④患者全血低速漩涡混匀后，用加样枪吸取混合好的25μL至125μL全血加到标记好的流式管内，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3～5s，室温避光孵育15min；

⑤孵育结束后，每个样本管内加入1mL的红细胞裂解液，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3～5s，室温避光孵育10min；

⑥孵育结束后，1200rpm/min转速离心6min，离心结束后，弃去上清液，加入1mL的PBS缓冲液，以同样的速度离心；

⑦离心后，以同样的方式去上清液，加入300μL的PBS缓冲液，用流式细胞仪检测；

⑧用不同流式细胞仪相应的分析软件分析嗜碱性粒细胞的计数及平均荧光强度。

7.根据权利要求6所述的一种嗜碱性粒细胞激活的鉴定方法，其特征在于：所述荧光标记流式抗体包括FITC、APC、APC/Cy7、PE、PE/Cy7或PerCP荧光标记的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DR和抗人CD203c抗体。