[发明专利]一种刺激软骨细胞外基质分泌的培养基

说明书

技术领域

本发明涉及软骨细胞培养领域，尤其涉及一种刺激软骨细胞外基质分泌的培养基。

背景技术

关节软骨主要是由软骨细胞和细胞外基质组成的无血管组织，主要依靠关节的运动和挤压吸收营养物质，所以软骨损伤后自我修复能力比较弱，临床研究对患者组织取材有限，并且也因为软骨细胞是终末分化细胞，体外增殖能力有限且易去分化，去分化是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。所以改善与维持软骨细胞表型在软骨细胞的临床应用中起着举足轻重的作用。

目前，为了延迟软骨细胞的去分化，维持软骨细胞表型，研究人员通过改善软骨细胞培养环境来改善与维持所述软骨细胞表型，在现有技术中，一是通过改变培养基成分来改善细胞培养环境，以改善或维持软骨细胞表型，二是模拟体内培养模式，将软骨细胞接种于三维支架材料中对所述软骨细胞进行培养，使得软骨细胞回复初始的软骨细胞表型，但是，随着软骨细胞的增殖都会出现明显的去分化趋势，在体外培养与临床应用上受到了限制。

发明内容

本发明的主要目的在于，提供一种刺激软骨细胞外基质分泌的培养基，能够在提高软骨细胞增殖能力的同时改善与维持软骨细胞表型，提高软骨细胞体内应用的稳定性与安全性。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明实施例提供一种刺激软骨细胞外基质分泌的培养基，其特征在于，用于刺激软骨细胞分泌软骨细胞外基质，包括：基础培养基、骨形成蛋白BMP-2或者其类似物、多西环素和地塞米松。

优选的，所述骨形成蛋白BMP-2在所述培养基中的浓度为2-10ng/ml，所述多西环素在所述培养基中的浓度为0.1-5μmol/ml，所述地塞米松在所述培养基中的浓度为0.2-2μg/ml。

可选的，所述培养基还包括：化学成份确定的脂，所述化学成分确定的脂能够参与细胞膜的合成，促进细胞增殖。

优选的，所述化学成分确定的脂选自胆固醇、维生素E、亚油酸与油酸中的至少一种。

进一步优选的，所述化学成份确定的脂占所述培养基总体积的1-5％。

可选的，所述培养基还包括50-100μg/ml的维生素C。

进一步可选的，所述培养基还包含3-20ng/ml的碱性成纤维生长因子bFGF和3-15ng/ml的转化生长因子TGF-β。

优选的，所述培养基还包含2-8μg/ml的胰岛素或者浓度为5-20ng/ml的胰岛素生长因子IGF-1。

可选的，所述培养基还包含占所述培养基总体积5-20％的血清。

优选的，所述血清为胎牛血清或者自体血清。

本发明实施例提供的一种刺激软骨细胞外基质分泌的培养基，用于刺激软骨细胞分泌软骨细胞外基质，包括：基础培养基、骨形成蛋白BMP-2或者其类似物、多西环素和地塞米松。该培养基在培养软骨细胞时，能够刺激所述软骨细胞分泌软骨细胞外基质，所述软骨细胞外基质包裹所述软骨细胞，使得软骨细胞模拟在体内的生存方式，在提高软骨细胞增殖能力的同时改善与维持软骨细胞表型，提高软骨细胞体内应用的稳定性与安全性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1为光学显微镜拍摄的软骨细胞材料A-G中的软骨细胞生长状态的光学显微照片；

图2为对软骨细胞材料A-G切片后进行甲苯胺蓝染色的光学显微照片；

图3为对软骨细胞材料A-G切片后进行Ⅱ型胶原免疫组化分析的光学显微照片。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。因此，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例所涉及的材料均可以通过商业途径或通过申请人获取。