[发明专利]一种软骨细胞组织工程材料及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种软骨细胞组织工程材料，其特征在于，包括：软骨细胞以及所述软骨细胞分泌的软骨细胞外基质，所述软骨细胞外基质包覆于所述软骨细胞外部，其中，所述软骨细胞外基质包括Ⅱ型胶原和糖胺聚糖。

2.根据权利要求1所述的软骨细胞组织工程材料，其特征在于，所述软骨细胞为人传代软骨细胞，其是由包括以下步骤的方法获取：

将分离软骨组织获得的人原代软骨细胞进行传代，在将上一次传代的人传代软骨细胞汇合至80％后，用上一次传代的人传代软骨细胞进行下一次传代，直至传代n次，其中，n大于等于2且小于等于4；

将第n次传代的人传代软骨细胞汇合至80％后，用胰酶消化第n次传代的人传代软骨细胞；

将经过消化的第n次传代的人传代软骨细胞离心，收集所述第n次传代的人传代软骨细胞。

3.一种软骨细胞组织工程材料的制备方法，其特征在于，包括：

将软骨细胞接种于培养孔板中，用软骨细胞培养基培养3-5周，期间每2-3天更换培养基一次；所述软骨细胞培养基刺激所述软骨细胞分泌软骨细胞外基质，所述软骨细胞外基质包裹所述软骨细胞，获得所述软骨细胞组织工程材料，其中，所述软骨细胞外基质包括Ⅱ型胶原和糖胺聚糖。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述软骨细胞培养基包括：基础培养基、骨形成蛋白BMP-2、多西环素和地塞米松。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述骨形成蛋白BMP-2在所述培养基中的浓度为2-10ng/ml，所述多西环素在所述培养基中的浓度为0.1-5μmol/ml，所述地塞米松在所述培养基中的浓度为0.2-2μg/ml。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述软骨细胞培养基还包括占所述培养基总体积1-5％的化学成份确定的脂，所述化学成份确定的脂选自胆固醇、维生素E、亚油酸与油酸中的至少一种。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述软骨细胞培养基还包括50-100μg/ml的维生素C、3-20ng/ml的碱性成纤维生长因子bFGF、3-15ng/ml的转化生长因子TGF-β、2-8μg/ml的胰岛素或者5-20ng/ml的胰岛素生长因子IGF-1。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述软骨细胞的接种密度为10⁴-10⁵/cm²。

9.根据权利要求3-8任一项所述的方法，其特征在于，所述软骨细胞组织工程材料为膜片状。

10.权利要求1或2所述的软骨细胞组织工程材料作为构建软骨组织的应用。