[发明专利]一种甘蓝子叶培养高频分化体系建立方法

权利要求书

1.一种甘蓝子叶培养高频分化体系建立方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）无菌苗的制取：选择甘蓝种子先用洗衣粉水浸泡10～30min,再用自来水漂洗干净,然后置于超净台上,用75%酒精消毒30～60s,再用0.1 %升汞溶液消毒10～30min，无菌水冲洗4～6遍后消毒滤纸吸干水分后置于MS培养基中，放入培养箱中进行发芽培养，温度为 25℃，3天统计污染率，7天统计发芽率和污染率以凤丹新抽芽为外植体，通过外植体消毒、愈伤组织诱导、增殖、丛生芽诱导、生根诱导等过程实验了凤丹的离体培养，为凤丹的工厂化生产和推广应用提供了技术支持；

（2）愈伤组织诱导：将步骤（1）培养获得的 5～7天苗龄的无菌苗，切取带1～2mm 子叶柄的子叶接种于诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养以凤丹新抽芽为外植体，通过外植体消毒、愈伤组织诱导、增殖、丛生芽诱导、生根诱导等过程实验了凤丹的离体培养，为凤丹的工厂化生产和推广应用提供了技术支持，接种后先黑暗条件下培养，待出现愈伤组织后再移至置于每天光照12～14小时，光照强度为1000～2000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计诱导率；

   （3）丛生芽诱导：将步骤（2）诱导得到的愈伤组织转接至芽诱导培养基中进行诱导分化培养，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计分化情况；

    （4）增殖培养：将步骤（3）诱导培养得到的丛生芽从基部切下并转接到增殖培养基中进行继代，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计增殖情况；

    （5）生根培养：将经步骤（4）分化培养得到的无根试管苗转接至生根培养基中进行生根，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃，空气相对湿度为75%的条件下培养30天后统计生根情况；

（6）炼苗移栽：试管苗生根20天后，具备发达健壮的根时将组培苗不揭瓶盖在自然光下炼苗7天，移栽时用镊子从瓶中取出组培苗,小心洗净基部残留的培养基,选择健壮苗移栽到消过毒的轻基质中，浇足水,遮荫处理，移栽后经常喷水,保持空气湿度，植株成活后转入正常土壤中定植。

2.    根据权利要求1所述的一种甘蓝子叶培养高频分化体系建立方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+3.0～6.0mg/L 6-BA+ 0.1～1.0mg/L NAA+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

3.根据权利要求1所述的一种甘蓝子叶培养高频分化体系建立方法，其特征在于步骤（3）所述的芽诱导培养基为：MS+1.0～3.0mg/L6-BA+0.1～0.3mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

4.根据权利要求1所述的一种甘蓝子叶培养高频分化体系建立方法，其特征在于步骤（4）所述的增殖培养基为：MS+0.1～0.5mg/LNAA+3.0～6.0mg/L6-BA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

5.根据权利要求1所述的一种甘蓝子叶培养高频分化体系建立方法，其特征在于步骤（5）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～3.0mg/LIBA+20～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。