[发明专利]一种连续制备萝卜硫素的方法

说明书

一、技术领域

本发明属于天然活性物质分离纯化技术领域，具体涉及萝卜硫素的制备方法。

二、背景技术

流行病学及药理学等的研究表明，十字花科蔬菜含有阻止或减缓癌症发展的活性成分，例如西兰花，是十字花科芸苔属甘蓝种中以绿色花球为产品的一个变种，其种子中含有丰富的硫代葡萄糖苷。硫代葡萄糖苷在硫代葡萄糖苷酶或酸的催化下，生成萝卜硫素等异硫氰酸盐。萝卜硫素是迄今为止蔬菜中发现的最强抗癌成分之一，它可诱导机体产生Phase II型解毒酶-谷胱甘肽转移酶和醌还原酶，该酶能解除亲电子致癌物质的毒性作用，干扰其对DNA的结合及破坏，同时抑制Phase I酶的产生，从而影响癌的形成。所以，从十字花科蔬菜中分离纯化萝卜硫素具有重要的科学价值和广阔的市场前景。

目前制备萝卜硫素的方法有：1.申请号为201210414994.2、名称为“一种高纯度萝卜硫素的提取纯化方法”的发明专利，该专利公开的方法是以干燥西兰花种子粉加水水解，获得固液混合物；再向该混合物中加入无水乙醇，进行超声浸提、抽滤或双层纱布过滤，获得滤液；接着对滤液进行真空浓缩，蒸发乙醇并获得浓缩液；浓缩液进行大孔树脂柱层析及用乙醇水溶液进行梯度洗脱，获得含萝卜硫素洗脱液并继续进行氧化铝柱层析、浓缩，获得萝卜硫素浸膏粗品；最后将获得的粗品加水溶解后用极性溶剂萃取，收集有机层冰并真空浓缩获得油状浸膏，即高纯萝卜硫素。该方法存在的主要问题是：①未对种子进行脱脂，由于油脂的阻挡，西兰花种子中的硫代葡萄糖苷和硫代葡萄糖苷酶难以有效接触，导致萝卜硫素的生成率低；②未对水解液进行pH、温度条件的控制，硫代葡萄糖苷酶对硫代葡萄糖苷的水解处于非优化环境，致使大量杂质生成，分离纯化困难且成本高；③用乙酸乙酯萃取的选择度低，不仅可萃取萝卜硫素，还可萃取其类似物，且在较高温度下真空浓缩，萝卜硫素不稳定，易重排生成多种异构体，产品纯度低；④无水乙醇回收率低，生产成本高，缺乏竞争力。2.申请号为201310408729.8、名称为“一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法”的发明专利，其公开的方法为：将新鲜西兰花的食用部分花枝脱水后烘至恒重并粉碎，获得西兰花干粉；将新收获的芥籽粉碎提取，再真空抽滤除杂，得到粗酶液；向所述西兰花干粉中加入所述粗酶液，搅拌均匀，经酶解、超声波振荡提取并过筛及真空抽滤除渣、真空浓缩后获得萝卜硫素粗提水溶液；向萝卜硫素粗提水溶液中加入乙酸乙酯萃取、收集乙酸乙酯相并真空浓缩成膏状萝卜硫素粗提物；将膏状萝卜硫素粗提物经冷冻干燥至恒重，即得纯度为1％～15％的萝卜硫素粗品。该方法存在的主要问题有：①新鲜西兰花食用部分含水量高达90％左右，进行干燥耗能极高且在高温环境下萝卜硫素快速分解；②新鲜芥籽受季节控制，难以常年生产且粗酶液中杂质和杂酶均多，水解生成的杂质多，萝卜硫素生成率低；③因为萝卜硫素在水溶液中的稳定时间仅约90分钟，而水解时间长达8小时，在此期间萝卜硫素大量重排或异构化，导致萝卜硫素生成率极低。由此可知，上述己公开发明专利存在着萝卜硫素生成率极低、生产时间长、能耗高、产品纯度低、成本高等共同缺陷，有必要进一步研发新方法，提升萝卜硫素生成率和纯度、降低生产成本。

三、发明内容

本发明的目的是针对现有制备萝卜硫素的方法的不足之处，提供一种以萝卜种子为原料，制备高纯度萝卜硫素的方法。该方法通过原料脱脂、对水解pH值、酶解温度、酶解时间的调节及外加萝卜硫苷等方式，实现萝卜硫素的连续、规模化和高纯度制备。该方法具有充分利用资源，萝卜硫素生成率高、可操作性强、可自动化连续化生产、产品纯度高达98％以上，绿色无污染等特点。