[发明专利]一种乳制品中乳清蛋白成分的快速分离检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种乳制品中乳清蛋白成分的检测方法，尤其是涉及一种婴幼儿乳制品中乳清蛋白成分的快速检测方法。

背景技术

乳清蛋白是一些小的、紧密的球状蛋白，其独特的氨基酸序列和三维结构赋予它广泛的功能特性，其必需氨基酸组成完全符合或超出FAO/WHO的要求。它的胆固醇、脂肪和乳糖含量低，易消化，易吸收。与其它蛋白质比较，具有最高的生物利用价值。生产工艺可影响乳清蛋白的功效，低温、膜超滤技术提取的未变性乳清蛋白的活性和功效最佳。

乳清蛋白的功能性成分包括：β-乳球蛋白占48％，α-乳清蛋白占19％左右，牛血清白蛋白占5％，免疫球蛋白(IgG)占8％，还含有乳铁蛋白、乳过氧化酶、生长因子和许多生物活性因子及酶，这些物质均具有一定的生物活性。乳清蛋白中必需氨基酸种类齐全，组成模式与人体相似，容易消化吸收，因而具有极高的生物利用效价。

牛乳中乳清蛋白和酪蛋白的比例约为20∶80，而人乳中这一比例超过60∶40，GB10765《食品安全国家标准婴幼儿食品》中规定乳基婴儿配方食品的蛋白质中乳清蛋白含量应≥60％。因此以牛乳为主要原料生产婴儿配方奶粉时，就要对乳清蛋白和酪蛋白的比例进行调整。但是世界各国尚没有乳清蛋白的权威检测方法和固定的检测标准。我国的婴幼儿食品国家标准中虽然把乳清蛋白列为检测项目，但现行国家标准GB 5413.2-1997是引进了日本森永公司的检测方法，只能测定乳清蛋白和酪蛋白的比例，且检测结果与实际含量误差较大、测定时间长、重现性差。使用液相色谱-质谱联用法和特异性肽段检测法检测乳制品中乳清蛋白的含量也有报道，如专利CN200910161153.3中提供一种分离和测定牛乳清蛋白的方法，它包括对乳清蛋白进行预处理、用以1.7μm亚乙基桥杂化颗粒为填料的超高效液相色谱柱将试样中的牛乳α-乳清蛋白和牛乳βa-乳球蛋白、牛乳βb-乳球蛋白完全分离和用质谱仪进行区间扫描，对未变性的上述牛乳白蛋白和牛乳球蛋白进行定量。在该方法中，添加人α-乳清蛋白作为内标。使用该方法，可以准确测定各种食品中的未变性的上述三种牛乳清蛋白的含量。但是奶制品尤其是奶粉经过较高加工温度，各种蛋白质存在不同程度的变性，这些变性后的蛋白质无法用该方法检测。同时该专利方法需要配备质谱仪等昂贵设备，而且存在样品前处理时间长、检测成本高等缺点。

另有专利CN201110283264中公开一种超高效液相色谱测定奶粉和牛奶中牛乳清蛋白含量的方法，包括在待测的奶粉和牛奶中加入含TritonX-100的盐酸提取液、超声溶解，用乙酸钠水溶液调整pH在4.4-4.6之间，用水定容、均质，室温静置后过滤，滤液通过滤膜，上ACQUITY UPLC BEH300C18色谱柱，采用ACQUITYUPLC-TUV超高效液相色谱系统测定奶粉和牛奶中Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg三种牛乳清蛋白的含量。运用相对简单高效的纯化步骤进行操作，实现Bα-La、Bβb-Lg和Bβa-Lg，的分离，保证了定量精度，并有效去除酪蛋白质和脂类等杂质干扰，提高了最终检测的灵敏度。方法的检出限为1μg/g。该方法中使用的ACQUITYUPLCBEH300C18色谱柱为亚乙基桥杂化颗粒(BEH)填充的硅烷基柱。但该方法中仅能检测α-乳清蛋白和两种β-乳球蛋白共三种牛乳清蛋白，因而其所得的乳制品中乳清蛋白含量的准确度有限，且该方法中并未公开分离和检测牛血清白蛋白和牛乳IgG等活性组分的方法。

而专利申请CN201410722848中公开一种测定乳基婴幼儿配方粉中乳清蛋白含量的方法，所述方法包括以下的步骤：①待检样品上样液的制备；②酪蛋白标准品和乳清蛋白标准品上样液的制备；③聚丙烯酰胺凝胶电泳；④染色与脱色；⑤成像与计算。所述的方法准确性高、操作简单、成本低。但该方法中只能计算乳清蛋白和酪蛋白中含量较高的成分，对于乳清蛋白中微量活性成分如乳铁蛋白、免疫球蛋白(牛乳IgG)等无法分离和测定。

因此研究一种准确、快速、低耗的乳制品中乳清蛋白成分，特别是婴幼儿奶粉中乳清蛋白成分的检测方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种适用于乳制品中的乳清蛋白快速检测方法。