[发明专利]鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系及其构建方法

说明书

本发明公开了一种鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系及其构建方法，该鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系的生物学名称为GGSK，其保藏号为CCTCC No：C201515。该鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系的构建方法包括以下步骤：对鞍带石斑鱼鱼体进行消毒、组织取样、原代培养和传代培养，传代的细胞可以长时间冻存，复苏率为73％‑88％；该细胞增殖速率快、成活率高、传代稳定、扩增用培养液成本低廉。

技术领域

本发明涉及生物细胞系技术领域，具体涉及一种鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系及其构建方法。

背景技术

鞍带石斑鱼(Epinephelus Lanceolatus)，又称龙胆石斑鱼，俗称龙胆，是石斑鱼类中体型最大的鱼类，有斑王之称。属鲈形目，鮨科，石斑鱼亚科，石斑鱼属。鞍带石斑鱼是我国一类重要海水养殖经济鱼类，由于其肉质鲜嫩、营养丰富，加之其生长快，适应性强，已成为我国南方海水养殖的重要对象。

近年来，随着养殖石斑鱼规模的不断扩大，集约化程度的不断提高，以及受养殖环境污染、管理技术措施相对滞后等诸多因素的影响，石斑鱼的病害也日益严重。石斑鱼疾病繁多，病原包括病毒、细菌、寄生虫等，尤其是由虹彩病毒、神经坏死病毒引起的病毒病最为严重，一旦暴发就会造成大规模死亡甚至全军覆没，每年因其造成的直接经济损失亿元以上，已经成为石斑鱼养殖业健康发展的重要制约因素之一。

查清病毒的感染途径及病毒与细胞相互作用机理是从根本上预防和解决石斑鱼等众多海洋经济鱼类病毒病的关键。细胞系作为一种体外培养系统，因其成本低、可重复性好、条件可控等优点，被广泛应用于病毒学、免疫学、毒理学、发育生物学、生理学、肿瘤学、基因组学、蛋白组学、遗传学等领域，尤其是在分离与培养病毒、研究病毒感染途径、感染机理以及研制病毒疫苗方面是重要的工具。

鱼类是较低等的脊椎动物，生活在病原更为富集的水环境中。鱼类皮肤是机体与外界水环境接触的门户,也是阻止病原微生物进入体内的第一道防线。鱼类的皮肤发挥了屏障的作用并且可以分泌黏液等抗菌物质。对于大多数鱼类而言，并不像陆生脊椎动物一样皮肤表面存在角质化的死细胞，相反，鱼类的表皮几乎全部由活细胞组成。鱼类的皮肤一旦受到化学或机械等损伤后，细菌、病毒或其他病原体就可以快速在鱼类开放性伤口内生长或进入体内。如对海水鱼类危害较为严重的淋巴囊肿病毒，通过皮肤伤口、鰓或消化道入侵机体，在局部增殖，再通过血液循环到达其他靶器官。

显然，鱼类皮肤组织来源细胞是进行鱼类病毒分离、鉴定与繁殖，进而研究鱼类病毒的致病机理、病毒宿主相互作用以及研制疫苗的良好材料。鱼类原代细胞系的构建技术目前是一种较为成熟的技术，但是要获得针对病毒敏感的细胞系仍存着很大的偶然性和困难性，所以构建一株需求鱼类细胞系有效的途径是以数量对质量，即制备大批量的原代细胞株，从而筛选出敏感的细胞系。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明提供一种鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系，该鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系具有传代稳定、存活率高的特点。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系，该鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系的生物学名称为GGSK，该鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系于2015年1月29提交保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学，邮编：430072，保藏登记入册编号为CCTCC No：C201515，保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学，邮编430072。

本发明的另一目的在于提供上述鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系的构建方法，技术方案如下：

一种鞍带石斑鱼皮肤组织细胞系的构建方法，该构建方法包括以下步骤：

1)组织取样：将鞍带石斑鱼鱼体消毒，无菌解剖，取皮肤组织，浸泡于漂洗液；