[发明专利]折叠氯代毒素、氯代毒素变异体与折叠氯代毒素变异体及其制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种折叠氯代毒素、氯代毒素变异体与折叠氯代毒素变异体及其制备工艺。

背景技术

近年来有学者发现一段由36 个氨基酸残基组成的多肽——氯代毒素（chlorotoxin，简称CTX）。该CTX 具有良好的肿瘤靶向性，能够特异性结合多种肿瘤细胞，如神经胶质瘤、恶性肉瘤、肠癌以及前列腺癌等。研究表明，CTX 通过基质金属蛋白酶-2（MMP-2）介导进入肿瘤细胞，而MMP-2 只在肿瘤细胞表面高量表达，正常细胞表面不表达，这就解释了CTX 特异性结合肿瘤细胞的原因。同时，研究显示CTX 虽然对无脊椎动物有强烈毒性，却对哺乳动物无毒。目前已有利用CTX 修饰的放射治疗药物131I-TM-601，正在接受FDA 审批，并已进入II 期临床试验阶段。还有研究将CTX 与荧光染料连接用于手术过程的肿瘤显像等。因此，CTX 可能成为一种肿瘤特异性非常高的靶向头基。

目前学界的研究方向都是基于氯代毒素（chlorotoxin），而对于其氯代毒素的折叠结构和变异结构缺少研究和创新，因此，限制了氯代毒素的应用潜力。

发明内容

本发明的第一个目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种折叠氯代毒素。

本发明的第二个目的是提供一种上述折叠氯代毒素的制备工艺。

本发明的第三个目的是提供一种氯代毒素变异体。

本发明的第四个目的是提供一种折叠氯代毒素变异体。

本发明的第五个目的是提供一种上述折叠氯代毒素变异体的制备工艺。

为实现本发明的第一个目的，为实现本发明的第一个目的，本发明的技术方案是其肽序列为MCMPCFTTDHQMARKCDDCCGGKGRGKCYGPQCLCR-NH2；

其结构式为：

为实现本发明的第二个目的，本发明的技术方案是包括有以下步骤：

按以下等比例构建反应体系：将40毫克的氯代毒素称量后置于放有100毫摩尔碳酸氢铵、2-4毫摩尔盐酸胍、10-200毫摩尔谷胱甘肽、10wt%二甲亚砜混合溶液的容器中；

将反应体系涡旋振荡直至溶液透明澄清，反应体系置于4摄氏度冷藏室中，反应1-24小时，获得折叠氯代毒素产物。

为实现本发明的第二个目的，本发明的技术方案还可以包括以下步骤：

是按以下数值等比例构建反应体系：氯代毒素称量后置于放有100毫摩尔碳酸氢铵、2毫摩尔乙二胺四乙酸二钠、3毫摩尔还原谷胱甘肽、1毫摩尔氧化谷胱甘肽、酸碱度pH～7.8的混合溶液的容器中，反应体系中氯代毒素浓度为0.05毫克/毫升；

将反应体系涡旋振荡直至溶液透明澄清，反应体系置于4摄氏度冷藏室中，反应6天，获得折叠氯代毒素产物。

为实现本发明的第三个发明目的，本发明的技术方案是该氯代毒素变异体的肽序列为：

MCMPCFTTDHQMARSCDDCCGGSGRGSCYGPQCLCR-NH2；

其由丝氨酸(Ser, S)取代氯代毒素肽序列中的赖氨酸(Lys, K)构成，其结构式为：

为实现本发明的第四个目的，本发明的技术方案是

该折叠氯代毒素变异体的肽序列为：

MCMPCFTTDHQMARSCDDCCGGSGRGSCYGPQCLCR-NH2；

其由丝氨酸(Ser, S)取代氯代毒素肽序列中赖氨酸(Lys, K)构成，

该折叠氯代毒素变异体的结构式为：

为实现本发明的第五个目的，本发明的技术方案是包括以下步骤：

按以下数值等比例构建反应体系：38毫克氯代毒素变异体称量后置于放有100毫摩尔碳酸氢铵、2-4毫摩尔盐酸胍、10-200毫摩尔谷胱甘肽、10wt%二甲亚砜混合溶液的容器中；

将反应体系涡旋振荡直至溶液透明澄清，反应体系置于4摄氏度冷藏室中，反应1-24小时，获得折叠氯代毒素变异体产物。

为实现本发明的第五个目的，本发明的技术方案还可以是包括以下步骤：

   按以下数值等比例构建反应体系：氯代毒素变异体称量后置于放有100毫摩尔碳酸氢铵、2毫摩尔乙二胺四乙酸二钠、3毫摩尔还原谷胱甘肽、1毫摩尔氧化谷胱甘肽、酸碱度pH～7.8的混合溶液的容器中，反应体系中氯代毒素变异体浓度为0.05毫克/毫升，

将反应体系涡旋振荡直至溶液透明澄清，反应体系置于4摄氏度冷藏室中，反应6天，获得折叠氯代毒素变异体产物。