[发明专利]一种具有生物活性的温敏性水凝胶及其制备方法

权利要求书

1.一种具有生物活性的温敏性水凝胶，其特征在于，它由以下方法制备得到：

1)制备HO-PEG-COOH：将聚乙二醇溶于四氢呋喃中，得到浓度为0.01～0.07g/mL的聚乙二醇溶液，向聚乙二醇溶液中加入CaH₂，室温下充分搅拌均匀后加入溴乙酸乙酯，其中聚乙二醇、CaH₂与溴乙酸乙酯摩尔比为1:0.85:1.7，充分搅拌后过滤，向滤液中加入正己烷，过滤出所得沉淀物，将沉淀物真空干燥后溶于水，得到浓度为0.2～0.6g/mL的水溶液，向所述水溶液中加入NaOH水溶液，使聚乙二醇与NaOH摩尔比为1:1.7，充分搅拌后用盐酸溶液调节pH值至12.5，加入二氯甲烷进行初次萃取，取水相并将pH值调至3，再向水相中加入二氯甲烷进行二次萃取，取有机相并加入正己烷，分离得到HO-PEG-COOH；

2)制备Ac-PEG-COOH：将步骤1)所得HO-PEG-COOH溶解于四氢呋喃中得到浓度为0.01～0.1g/mL的HO-PEG-COOH溶液，并加入丙烯酰氯和三乙胺，使HO-PEG-COOH与丙烯酰氯、三乙胺摩尔比为1:2.3:2.5，室温反应3～6小时后过滤，向所得滤液中加入正己烷，沉淀物分离、干燥得到Ac-PEG-COOH；

3)制备Ac-PEG-Ac：将聚乙二醇溶解于四氢呋喃中，得到浓度为0.01～0.07g/mL的聚乙二醇溶液，向聚乙二醇溶液中加入丙烯酰氯和三乙胺，使聚乙二醇与丙烯酰氯、三乙胺的摩尔比为1:3:3.5，室温反应1～4小时后过滤，向所得滤液中加入正己烷，沉淀物分离、干燥得到Ac-PEG-Ac；

4)制备Ac-PEG-g-IKVAV：将步骤2)制备的Ac-PEG-COOH溶解于四氢呋喃中，加入二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，使Ac-PEG-COOH与二环己基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺摩尔比为1:2.5:2.5，活化0.5～2小时后加入IKVAV多肽和N,N-二异丙基乙胺，其中Ac-PEG-COOH与IKVAV多肽、N,N-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1.5:1.5，室温下反应2～6h后加入正己烷，沉淀物分离、干燥得到Ac-PEG-g-IKVAV；

5)制备PNIPAM-b-PEG-g-IKVAV前驱体：以N-异丙基丙烯酰胺为反应单体,4-氰基戊酸二硫代苯甲酸酯为RAFT链转移剂，偶氮二异丁腈为引发剂，1,4-二氧六环为溶剂，各组分摩尔比为：N-异丙基丙烯酰胺:4-氰基戊酸二硫代苯甲酸酯:偶氮二异丁腈＝100～40:1:0.01～0.03，抽真空密封后于60～80℃反应5～8h后用乙醚沉淀分离出PNIPAM，将PNIPAM溶于四氢呋喃中得到浓度为0.1～0.6g/mL的四氢呋喃溶液，再加入步骤4)所得Ac-PEG-g-IKVAV和偶氮二异丁腈，其中PNIPAM与Ac-PEG-g-IKVAV摩尔比为1:1，PNIPAM与偶氮二异丁腈摩尔比为9.5～23:1，密封抽真空后于60～80℃反应6～12h，反应结束后加入正己烷，沉淀物分离、干燥得到PNIPAM-b-PEG-g-IKVAV前驱体；

6)制备具有生物活性的温敏性水凝胶：将步骤5)所得PNIPAM-b-PEG-g-IKVAV前驱体溶于DMF，再加入步骤5)所得PNIPAM、小分子交联剂、步骤3)所得Ac-PEG-Ac以及AIBN，各组分摩尔比为：PNIPAM-b-PEG-g-IKVAV前驱体:PNIPAM:小分子交联剂:Ac-PEG-Ac:AIBN＝1:280～700:3000～5000:100～300:200～500，抽真空密封后于60～80℃反应6～24h，所得凝胶用去离子水清洗后得到具有生物活性的温敏性水凝胶。

2.根据权利要求1所述的具有生物活性的温敏性水凝胶，其特征在于步骤1)所述聚乙二醇分子量为2000；步骤3)所述聚乙二醇分子量为4000。

3.根据权利要求1所述的具有生物活性的温敏性水凝胶，其特征在于步骤4)所述IKVAV多肽为吉尔生化(上海)有限公司生产，产品型号为No:P110124-WY061697。

4.根据权利要求1所述的具有生物活性的温敏性水凝胶，其特征在于步骤6)所述小分子交联剂为N,N-亚甲基双丙烯酰胺、二乙烯基苯、二甲基丙烯酸乙二醇酯中的一种。