[发明专利]用于诊治癌转移的生物标志物及其用途

说明书

本发明涉及用于诊治癌转移的生物标志物及其用途，更具体的涉及mir‑1185‑1和/或其成熟miRNA在诊断肺腺癌转移中的新用途。发明通过对肺腺癌患者进行回顾性分析，将其分成两组：肺腺癌转移组和非转移组，通过测序分析获得miRNA表达数据，进而进行生物信息学分析，选取后备miRNA进行分子生物学验证，结果显示，本发明提供的miRNA和肺腺癌转移密切相关，可用于临床诊断及预防检测，具有很好的实际应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的涉及用于诊治癌转移的生物标志物及其用途，更具体的涉及mir-1185-1和/或其成熟miRNA在诊治肺腺癌转移中的新用途。

背景技术

在我国由于肺癌所致的死亡占全部肿瘤相关死亡的23％左右，大约90％的恶性肿瘤的死亡与肿瘤转移有关，绝大多数肺癌患者由于肿瘤细胞的局部侵袭及远处转移，确诊时己经失去手术机会。因此，深入了解参与肺癌侵袭及转移的因子及可能的机制，对于肺癌的早期干预及个体化治疗提供指导，以期能改善肺癌的预后。肺腺癌(lungadenocarcinoma)属于非小细胞肺癌，易发生于女性及不抽烟者。在肺部的位置常较周边，肿瘤扩大的速度较慢(倍增时间约120天)。早期无征兆，通常诊断出来时已经是晚期。非小细胞肺癌占肺癌总数的75％-80％。

miRNA通常由RNA聚合酶II(Pol II)转录生成。Pol II结合在以后形成发夹结构的颈环DNA序列附近。生成的转录本经修饰添加5’帽子结构和3’末端多腺苷酸尾巴结构，并剪切，生成的产物称为初级miRNA(pri-miRNA)，该产物可能长达数千或数百核苷酸，可能包含多个miRNA环结构。

单个pri-miRNA可能含一到六个miRNA前体。这些发夹结构每个由约70nt左右的核苷酸组成。每个发卡结构附以部分序列以利于有效剪切处理。pri-miRNA中的双链发夹RNA结构被叫做DGCR8的核蛋白(DiGeorge Syndrome Critical Region 8)辨认，DGCR8同Drosha酶一起形成微处理(microprocessor)复合体。在该复合体中，DGCR8组织Drosha蛋白的RNase III结构域使其在距离发卡结构约11个核苷酸处切割pri-miRNA，使其释放发卡结构。释放的发卡结构即为前miRNA(pre-miRNA),pre-miRNA在3’存在两个悬空的核苷酸，pre-miRNA 5’为磷酸集团，3’为羟基集团。

在胞浆中，pre-miRNA发夹结构经RNase III Dicer切割处理。这种内源性核糖核酸酶(endoribonuclease)与发夹结构的3’相互作用并在环的3’和5’臂上完成切割，产生长约22nt并不完美匹配的miRNA：miRNA*双链结构。

miRNA与靶mRNA的典型作用方式主要有两种。在大多数情况下，复合物中的单链miRNA与靶mRNA的3’UTR不完全互补配对，阻断靶基因的翻译，从而调节基因表达。这种方式主要影响蛋白表达水平，并不影响mRNA的稳定性。近来，有研究对翻译抑制理论提出质疑，发现被抑制的靶mRNAs和miRNAs共同聚集于胞浆中被称为P小体(processing bodies，P-bodies)的区域，这个区域还浓缩了许多参与mRNA降解的酶类。P小体可能是作为未翻译mRNA进行暂时的可逆储存的容器，减少一些特定P小体组成蛋白的表达能够缓和miRNA介导的基因表达抑制作用。P小体是胞浆中的一定区域，它包含参与多种转录后过程的蛋白质，例如：mRNA降解(mRNA degradation)、无义介导mRNA衰退(nonsense-mediated mRNAdecay,NMD)，转录抑制及RNA介导的基因沉默(RNA-mediated gene silencing)。