[发明专利]一种基于银纳米颗粒的乙酰胆碱酯酶活性检测试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于银纳米颗粒的胆碱酯酶活性检测侧向层析试纸条。

背景技术

目前，化学农药，特别是有机磷农药的大量使用对人们的身体健康以及环境安全具有较大的威胁，因此对有机磷农药的高灵敏检测具有较大的社会意义。

有机磷类农药种类繁多，目前的检测方法，特别是快速检测方法难以实现有机磷农药多组分多残留的同时检测。研究发现，有机磷农药是一类能够降低胆碱酯酶活性的化合物，因此人们利用胆碱酯酶活性的变化可以检测农产品中有机磷农药的残留量。如目前使用比较多的Ellman比色法。但该方法灵敏度较低，并且对仪器有一定的依赖，因此建立一种操作简便、快速，灵敏度高，对仪器无依赖的胆碱酯酶活性检测方法对有机磷农药多组分、多残留的快速检测具有较大的意义。

本发明提供了一种基于银纳米颗粒的胆碱酯酶活性检测侧向层析试纸条。该试纸条包括纸板，纸板的一面自上到下依次黏贴吸水纸、检测垫、还原垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接。其中检测垫为硝酸纤维素膜，该膜自上而下设置了三条检测线，分别包被了浓度由高到低的硝酸银水溶液；还原垫为玻璃纤维，喷涂有一定浓度的维生素C的HEPES溶液。该试纸条可用于胆碱酯酶活性的快速检测，具有使用简便，灵敏度高，检测结果无需依靠仪器分析等优势。所建立的检测试纸条，对活性胆碱酯酶检测灵敏度可达到0.01nM，可为胆碱酯酶活性检测提供新的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种可用于快速半定量检测胆碱酯酶活性的侧向层析试纸条。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种基于银纳米颗粒的胆碱酯酶活性检测试纸条。该试纸条包括纸板，纸板的一面自上到下依次黏贴吸水纸、检测垫、还原垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接。其中检测垫为硝酸纤维素膜，该膜自上而下设置了三条检测线，分别包被了浓度由高到低的硝酸银水溶液；还原垫为玻璃纤维，喷涂有浓度为0.08M的维生素C的HEPES溶液。

所述的试纸条上的衬板为不吸水的韧性材料，为硬质塑胶条或不吸水硬纸条制成。

所述的还原垫和样品垫为玻璃纤维素膜，由玻璃纤维素棉制成。

所述的吸水纸为吸水能力较强的吸水滤纸或滤油纸。

所述的纤维素膜为硝酸纤维素膜。

有益效果

本发明结合侧向层析试纸条以及纳米材料的优势，所建立的用于快速检测胆碱酯酶活性的侧向层析试纸条灵敏度高，携带方便，检测结果可不依赖仪器。该试纸条检测灵敏度可达到0.01nM。

具体实施方式

1.用于检测胆碱酯酶活性的侧向层析试纸条的组装

本发明提供一种基于银纳米颗粒的胆碱酯酶活性检测试纸条。该试纸条包括纸板，纸板的一面自上到下依次黏贴吸水纸、检测垫、还原垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接。其中检测垫为硝酸纤维素膜，该膜自上而下设置了三条检测线，分别包被了浓度为0.5，0.3，0.3nM的硝酸银水溶液，包被后，检测垫避光条件下，37℃真空干燥1-2小时；还原垫为玻璃纤维，喷涂有浓度为0.1M的维生素C的HEPES溶液，喷涂后，还原垫37℃真空干燥1小时。吸水纸为吸水能力较强的吸水滤纸或滤油纸，样品垫为玻璃纤维塑膜，吸水纸与样品垫组装前无需特殊处理。

该试纸条组装前后，应避光、干燥保存。

2.乙酰胆碱酯酶活性的检测

将乙酰胆碱酯酶配成梯度浓度的HEPES溶液，浓度分别为：0.01，0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0nM，依次与0.5mg/mL的丁酰胆碱(BTcH)等体积混匀。混合液在37℃下反应15分钟，分别取各浓度反应液120uL进行侧向层析测试。其中，设定同等浓度的BTcH的HEPES溶液作为空白对照。

层析7分钟后，将检测线上颜色进行比对：空白对照中，因为没有胆碱酯酶的催化，试纸条上三条检测线均显示出明显的黄色(银纳米颗粒的颜色)；随着胆碱酯酶浓度的提高，溶液中对丁酰胆碱的催化能力提高，层析液中巯基浓度升高，进而降低检测线上黄色的强度。依据三条检测线的颜色完全消失、显色较弱以及完全显色的三个强度，将胆碱酯酶的检测范围划分为：＜0.01nM，(0.01，0.02]，(0.02，0.05]，(0.05，0.1]，(0.1，1.0]，以及＞1.0nM等6个浓度区间，进而实现对胆碱酯酶活性的快速半定量检测。