[发明专利]杂交瘤细胞株F3A2，其产生的单克隆抗体及应用

说明书

本发明涉及用于检测有机磷农药甲基对硫磷的单克隆抗体及其应用。本发明提供的杂交瘤细胞株F3A2可以用于制备高效识别甲基对硫磷的单克隆抗体，采用鼠腹水抗体酶联免疫吸附分析法测得的效价为1.2×10⁴。该抗甲基对硫磷单克隆抗体灵敏度高，对甲基对硫磷的50％抑制浓度(IC50)为21.2ng/mL，与甲基对硫磷结构类似的农药如杀螟硫磷、水胺硫磷、甲基毒死蜱、辛硫磷等有机磷农药的交叉反应率均小于0.1％，可用于有机磷农药甲基对硫磷残留的快速检测。

技术领域

本发明涉及可分泌用于检测有机磷农药甲基对硫磷的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体及应用。

背景技术

甲基对硫磷俗称甲基1605，学名O，O-二甲基-O-(4一硝基苯基)硫代磷酸酯，一种有机磷杀虫剂。工业产品为带蒜臭的黄棕色油状液体，纯品为白色结晶，熔点36～36.5℃，难溶于水，易溶于有机溶剂，加热会异构化，高温或遇碱易分解。急性毒性LD50值：对大白鼠经口为14～24mg/kg，对兔经皮为300～400mg/kg，属高毒级农药。因其杀虫谱广，杀虫效果好，在防治农业害虫中有较大的应用，因此，该农药的残留对环境以及人畜安全具有潜在的威胁。

目前，化学农药的残留检测多采用薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等方法。这些方法结果可靠，灵敏度高，已有相关的技术标准可供参考。但由于需要昂贵的仪器、专门的操作人员，以及样品前处理复杂、成本高、时间长，因此不能更好地满足快速简便的现场检测要求。

免疫检测方法具有快速、廉价、简便、特异的优点，便携而有利于进行现场监测，克服了传统检测方法的缺点。已在医疗、食品等多个领域有较大的应用。本发明利用甲基对硫磷免疫半抗原合成人工免疫原，免疫BALB/C小鼠后利用杂交瘤细胞技术筛选出可分泌高效识别农药甲基对硫磷单克隆抗体的杂交瘤细胞株F3A2。通过酶标抗甲基对硫磷单克隆抗体建立针对农产品中有机磷农药甲基对硫磷的高灵敏度免疫检测方法(ELISA)：对甲基对硫磷的50％抑制浓度(IC50)为21.2ng/mL，与甲基对硫磷结构类似的农药如杀螟硫磷、对硫磷、水胺硫磷、甲基毒死蜱、辛硫磷等有机磷农药的交叉反应率均小于0.1％，针对甲基对硫磷在蔬菜、水和土壤中的添加回收率在95％-110％之间，可用于有机磷农药甲基对硫磷残留的快速检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种可稳定分泌抗有机磷农药甲基对硫磷单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体。

本发明的另一目的是建立可用于农产品中甲基对硫磷残留快速检测的高灵敏免疫检测方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

本发明提供提供了杂交瘤细胞株F3A2，该细胞株已于2015年3月31日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCCNO.C201510。

识别有机磷农药甲基对硫磷的单克隆抗体，由保藏编号为CCTCC NO.C201510的杂交瘤细胞株F3A2分泌产生。该抗甲基对硫磷单克隆抗体可以高效、特异性识别倍硫磷，对甲基对硫磷的50％抑制浓度IC50为21.2ng/mL。

本发明提供的杂交瘤细胞株F3A2是通过将甲基对硫磷人工免疫原常规免疫BAlB/C小鼠，利用杂交瘤细胞技术将效价最好的小鼠脾细胞与SP2/0进行融合，并利用ELISA方法对获得的阳性克隆孔进行筛选，最终筛选出阳性值与竞争效果最好的孔，采用有限稀释法进行亚克隆，克隆后再次进行筛选，如此反复筛选3-5次之后，最终筛选获得杂交瘤细胞株F3A2。

本发明提供的抗甲基对硫磷单克隆抗体来自于BALB/C小鼠腹腔。该小鼠经过液体石蜡预处理后，注射杂交瘤细胞株F3A2，并采集该小鼠的腹水，利用辛酸-硫酸铵法进行纯化，收集得到抗甲基对硫磷单克隆抗体，并应用于甲基对硫磷的免疫检测方法的建立。

本发明的有益效果在于：