[发明专利]一种心肌组织工程产品及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种心肌组织工程产品的制备方法，其包括：

(1)制备大网膜脱细胞基质支架材料，其包括使用含十二烷基硫酸钠、DNA酶和胰蛋白酶的脱细胞液浸泡大网膜进行脱细胞处理的步骤；以及

(2)构建并培养心肌细胞-大网膜脱细胞基质复合体。

2.如权利要求1所述的方法，其中步骤(1)还包括脱脂处理步骤。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述脱脂处理步骤使用体积比为1∶1∶0.2-1的甲醇、氯仿和乙醚的混合溶液进行。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述脱脂处理步骤使用体积比为1∶1∶0.4-0.7的甲醇、氯仿和乙醚的混合溶液进行。

5.如权利要求2所述的方法，其中所述脱脂处理步骤使用体积比为1∶1∶0.5的甲醇、氯仿和乙醚的混合溶液进行。

6.如权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中在进行脱细胞处理的过程中还进行震荡。

7.如权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中在脱细胞处理的步骤中，将大网膜组织于PBS中清洗，并震荡浸泡于包含十二烷基硫酸钠、DNA酶和胰蛋白酶的脱细胞液中处理，脱细胞液中十二烷基硫酸钠、DNA酶和胰蛋白酶的含量分别为1-3％重量比的十二烷基硫酸钠、3500-4500U/L的DNA酶和0.1-0.5％重量比的胰蛋白酶。

8.如权利要求6所述的方法，其中在脱细胞处理的步骤中，将大网膜组织于PBS中清洗，并震荡浸泡于包含十二烷基硫酸钠、DNA酶和胰蛋白酶的脱细胞液中处理，脱细胞液中十二烷基硫酸钠、DNA酶和胰蛋白酶的含量分别为1-3％重量比的十二烷基硫酸钠、3500-4500U/L的DNA酶和0.1-0.5％重量比的胰蛋白酶。

9.一种心肌组织工程产品的制备方法，其特征在于，按照以下操作步骤进行：

(1)制备大网膜脱细胞基质支架材料

将新鲜的大网膜组织震荡浸泡于由甲醇、氯仿与乙醚以体积比为1∶1∶0.2-1混合而成的脱脂溶液中处理，脱脂溶液浸泡时间为18-30h，震荡频率为150-250r/min；将去除脂肪的大网膜组织于PBS中清洗，并震荡浸泡于由十二烷基硫酸钠、DNA酶和胰蛋白酶组成的脱细胞液中处理，脱细胞液中十二烷基硫酸钠、DNA酶和胰蛋白酶含量分别为1-3％重量比的十二烷基硫酸钠、3500-4500U/L的DNA酶、0.1-0.5％重量比的胰蛋白酶，浸泡时间为12-24h，震荡频率为100-200r/min；将经脱细胞液处理后的大网膜组织经冷冻干燥后辐照灭菌；

(2)构建并培养心肌细胞-大网膜脱细胞基质复合体

将1×10⁶-1×10⁷/mL的心肌细胞悬液1-3mL接种于步骤(1)制备的大网膜脱细胞基质材料上，得到复合构建物；将复合构建物培养于37℃、5％CO₂孵箱中1-2h，然后添加DMEM培养液8-15mL，继续培养至第7-21天，每12h更换一次培养液，培养结束即可获得心肌组织工程产品。

10.如权利要求1至5、8和9中任一权利要求所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的新鲜的大网膜组织来源于哺乳类动物。

11.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的新鲜的大网膜组织来源于哺乳类动物。

12.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的新鲜的大网膜组织来源于哺乳类动物。

13.如权利要求10所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的新鲜的大网膜组织来源于猪、牛或羊。

14.如权利要求11或12所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的新鲜的大网膜组织来源于猪、牛或羊。

15.根据权利要求1-14中任一权利要求所述的方法获得的产品，其包含心肌细胞和大网膜脱细胞基质支架材料。

16.权利要求15所述的产品在制备用于心肌细胞再生的药物中的用途。

17.权利要求15所述的产品在制备用于心肌组织修复的药物中的用途。