[发明专利]一种基于大网膜脱细胞基质的组织工程皮肤及其构建方法

权利要求书

1.一种组织工程皮肤的构建方法，包括以下步骤：

(1)制备大网膜脱细胞基质支架材料，其包括使用含十二烷基硫酸钠与DNA酶的缓冲液浸泡大网膜进行脱细胞处理的步骤；以及

(2)组织工程皮肤构建与培养，

其中所述脱细胞处理的步骤是分梯度进行的，所述梯度包括至少第一梯度和第二梯度，其中：

在所述第一梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为1.5-3.5％重量比，DNA酶的浓度为3500-4500U/L，pH为7.2-7.4，并且

在所述第二梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为0.6-1.5％重量比，DNA酶的浓度为2500-3500U/L，pH为7.2-7.4，

其中所述梯度还包括第三梯度，其中在所述第三梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为0.1-0.6％重量比，DNA酶的浓度为1500-2500U/L，pH为7.2-7.4。

2.如权利要求1所述的方法，其中在进行脱细胞处理的步骤中还进行震荡。

3.如权利要求1所述的方法，其中步骤(1)还包括脱脂处理的步骤。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述脱脂处理的步骤使用体积比为1∶1∶0.2-1的甲醇、氯仿和乙醚的混合溶液进行。

5.如权利要求3所述的方法，其中所述脱脂处理的步骤使用体积比为1∶1∶0.4-0.7的甲醇、氯仿和乙醚的混合溶液进行。

6.如权利要求3所述的方法，其中所述脱脂处理的步骤使用体积比为1∶1∶0.5的甲醇、氯仿和乙醚的混合溶液进行。

7.如权利要求1所述的方法，其中：

在所述第一梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为1.5-2.5％重量比，DNA酶的浓度为3600-4400U/L，并且

在所述第二梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为0.7-1.3％重量比，DNA酶的浓度为2600-3400U/L。

8.如权利要求7所述的方法，其中：

在所述第一梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为1.8-2.2％重量比，DNA酶的浓度为3800-4200U/L，并且

在所述第二梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为0.8-1.2％重量比，DNA酶的浓度为2800-3200U/L。

9.如权利要求7所述的方法，其中：

在所述第一梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为2.0％重量比，DNA酶的浓度为4000U/L，并且

在所述第二梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为1.0％重量比，DNA酶的浓度为3000U/L。

10.如权利要求1所述的方法，其中在所述第三梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为0.2-0.6％重量比，DNA酶的浓度为1600-2400U/L。

11.如权利要求10所述的方法，其中在所述第三梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为0.4-0.6％重量比，DNA酶的浓度为1800-2200U/L。

12.如权利要求10所述的方法，其中在所述第三梯度中，十二烷基硫酸钠的浓度为0.5％重量比，DNA酶的浓度为2000U/L。