[发明专利]一种生产达巴万星前体A40926的方法

说明书

本发明公开了一种生产达巴万星前体A40926的方法。具体公开了，在发酵培养过程中，通过向发酵液中流加10‑甲基十一烷酸或者几种10‑甲基十一烷酸盐溶液来提高达巴万星前体A40926的产量。本发明提供的方法操作简单，显著提高了发酵产量，降低了生产成本，适于工业化生产。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体地，涉及一种生产达巴万星前体A40926的方法。

背景技术

达巴万星(Dalbavancin) 是新一代糖肽类抗生素，和万古霉素、雷莫拉宁属于同一类。这一类抗生素用于治疗那些最难对付的细菌感染，如甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌（MRSA）和甲氧西林耐药性表皮葡萄球菌（MRSE）。体外实验显示，达巴万星除了对临床常见的革兰氏阳性菌杀菌活性增强外，其半衰期更长，组织穿透性更好，这样患者给药具有更大的灵活性。至今所进行的临床前和临床研究显示，达巴万星是对MRSA和MRSE活性最强的抗生素之一，并且没有引起显著的剂量限制性不良反应。

达巴万星作用机制与万古霉素和替考拉宁相同，抑制G⁺菌细胞壁的生物合成，被广泛用作治疗皮肤和软组织感染的药物。体内、外试验表明，达巴万星对于G⁺菌，包括耐甲氧西林金葡球菌(MRSA)、甲氧西林敏感金葡球菌(MSSA)、凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)、链球菌等具有抗菌活性。对耐G⁺病原菌包括耐青霉素和头孢曲松肺炎链球菌、替考拉宁不敏感CoNS、非vanA型肠球菌具有活性；对G⁺厌氧菌也具有活性。达巴万星具有独特的药动学性质，可每周间隔用药。目前，达巴万星在治疗导管相关的血源性感染以及皮肤和软组织感染已取得了良好的效果，其具有优良的体内抗菌活性和安全性，是理想的第二代糖肽类抗生素。其前体A40926是由野野村放线菌属(Nonomuraea)sp．ATCC39727产生的天然糖肽类抗生素。A40926进行化学结构修饰后可得达巴万星。美国食品和药物管理局（FDA）已于2014年5月23日已经批准达巴万星上市。

达巴万星前体A40926目前主要通过微生物发酵来进行生产，A40926及其衍生物结构式如下：

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发酵产生5个主要组分：PA、PB、A、B0和B1，B0和B1统称B组分。发酵液中PA、PB在分离纯化过程中长时间在碱性环境中温育时，会转化为A、B。其中，B0组分为A40926的主要有效组分，是合成达巴万星的关键中间体，其特征在于葡糖胺上脂肪酸链是异十二烷基，A40926生物合成中在酰基转移酶的作用下将来自自身细胞膜的脂肪酸进行部分分解后，形成酰基链连接到葡糖胺的氨基上是造成这一差异的主要因素(Factors influencing cellfatty acid composition and A40926 antibiotic complex production in Nonomuraea sp. ATCC 39727)。

目前国内外关于A40926发酵工艺方面报道较少，意大利的VicuronPharmaceuticals制药公司报道的发酵配方营养成分简单，菌种活力不强，发酵单位仅128mg/L。

Beltrametti等研究发现，L-缬氨酸是B0组分的分支酰基链的潜在前体，在发酵培养基中加入L-缬氨酸可以增加产物中B0组分的比例，同时提高A40926的总产量(ValineInfluences Production and Complex Composition of Glycopeptide AntibioticA40926 in Fermentations of Nonomuraea sp. ATCC 39727。J Antibiot (Tokyo). 2004Jan;57(1):37-44)，但发酵单位提高幅度有限仅有220mg/L。