[发明专利]一种小麦寡分蘖基因Ltn3的分子标记HRM5及其应用有效
申请号: | 201510222213.3 | 申请日: | 2015-05-04 |
公开(公告)号: | CN104818271B | 公开(公告)日: | 2018-04-27 |
发明(设计)人: | 刘亚西;王智强;高尚;石浩然;莫洪君;卢艳丽;王益;魏育明;郑有良 | 申请(专利权)人: | 四川农业大学 |
主分类号: | C12N15/11 | 分类号: | C12N15/11;C12Q1/6895 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司11002 | 代理人: | 王文君 |
地址: | 611130 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 小麦 分蘖 基因 ltn3 分子 标记 hrm5 及其 应用 | ||
1.一种小麦寡分蘖基因Ltn3的分子标记HRM5,其特征在于,所述分子标记HRM5的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示;
所述分子标记与小麦寡分蘖基因Ltn3共定位于小麦2D染色体,且与Ltn3之间的遗传距离为0.35cM;
小麦寡分蘖基因Ltn3显著降低小麦分蘖,LOD值大于5.31。
2.权利要求1所述小麦寡分蘖基因Ltn3的分子标记HRM5的鉴定方法,其特征在于,以待测植株样品的基因组DNA作为模板,用荧光定量PCR引物进行荧光定量PCR扩增,利用扩增结果进行基因型分型,将与小麦H461分为同一类型的植株鉴定为含有小麦寡分蘖基因Ltn3的分子标记HRM5的植株;
所述荧光定量PCR引物的上游引物序列如SEQ ID No.2所示,下游引物序列如SEQ ID No.3所示。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)以待测植株样品的基因组DNA作为模板,用荧光定量PCR引物进行荧光定量PCR扩增;
(2)荧光定量PCR扩增反应体系:SsoFast EvaGreen超混合液5μL、上游引物和下游引物各300ng、模板DNA 100ng、去离子水加至总量为10μL;其中,所述上游引物序列如SEQ ID No.2所示,所述下游引物序列如SEQ ID No.3所示;
(3)荧光定量PCR程序:95℃预变性5分钟;94℃变性15秒、53℃退火30秒,共50个循环;熔解曲线范围为65~95℃,每0.2℃读一次数,时间为10秒;
(4)利用步骤(3)获得的结果进行基因分型。
4.权利要求1所述分子标记HRM5的荧光定量PCR引物,其特征在于,上游引物序列如SEQ ID No.2所示,下游引物序列如SEQ ID No.3所示。
5.权利要求1所述分子标记HRM5在小麦育种中的应用。
6.权利要求4所述的荧光定量PCR引物在分子标记辅助小麦株型育种中的应用。
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