[发明专利]心脑宁片中人参皂苷Rg1和Re含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于医药分析技术领域，具体涉及一种心脑宁片中人参皂苷Rg₁和Re含量的测定方法。

背景技术

心脑宁片为治疗缺血性中风新型药物，是根据标本兼治的治则而组方的。它是由人参、当归、川芎、黄芪制成，有补气行血、活血化瘀、通脉搜络之功。其中，人参皂苷Rg₁、Re是方中人参的主要有效成分，为控制该药品的质量，保证疗效，需对方中的人参皂苷Rg₁、Re进行测定，以确保其含量在规定的范围之内。

现有技术中通常使用高效液相色谱法(HPLC)测定心脑宁片中人参皂苷Rg₁、Re的含量。但，中药材中化合物组成复杂，次生代谢产物结构非常类似，并有较多的异构体存在，且活性成分含量往往较低，所以常规检测方法难以适用。HPLC和其他分离方法相比具有柱效高、灵敏度高、适用范围广等优点，为中药分析研究工作提供了条件。近年来，应用高效液相色谱分析中药成分已成为控制中药质量的重要手段之一。

等度和梯度洗脱是高效液相色谱中的两种基本操作模式。前者在分离的过程中流动相的组成不随时间的改变而发生变化，而后者则会发生变化，其中又以线性和阶梯梯度应用最多。在实践中，通过将等度、线性和阶梯梯度进行组合，可衍生出无数种具有不同形状的梯度曲线，这就大大增加了分离条件选择的灵活性。此外，梯度洗脱还可以缩短分析时间以及压缩谱带的宽度，因此在复杂样品如中药等的分离中有着非常广泛的应用。

尽管现有技术中已开发出了一些中药材3种皂苷含量的高效液相色谱梯度洗脱同时测定方法，例如：文献2-高效液相色谱梯度洗脱法同时测定保心宁片中3种皂苷含量，《药物鉴定》，第20卷第1期；文献3-HPLC测定益心舒胶囊中人参皂苷Rg₁，Re，Rb₁，《中国实验方剂学杂志》，第16卷第11期。但遗憾的是由于心脑宁片原料药组分分离，次生代谢产物高度类似，难以厘清其洗脱机理；而等度、梯度洗脱的组合衍生数近似于天文数字，并且梯度洗脱的分离机理极为复杂，因而不能通过常规的设计实验来筛选得到。

发明内容

本发明的目的之一在于针对现有技术中心脑宁片中有效成分人参皂苷Rg₁和Re的定量测定方法分离度差，需要分别检测以及检测花费时间长和成本高的技术问题，提供一种心脑宁片中人参皂苷Rg₁和Re含量的测定方法，该方法是经过发明人长达数年坚持不懈的努力和创造性的实验设计得出。

为解决现有的技术问题，本发明采用了以下技术方案：

本发明提供一种心脑宁片中人参皂苷Rg₁和Re含量的测定方法，具体包括如下步骤：

1、色谱条件及系统适应性：色谱柱：AgilentTC-C18，4.6×250mm；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按照下表进行等度和线性梯度洗脱；流速为每分钟1.0mL；柱温为40℃；检测波长为203nm；理论塔板数按人参皂苷Rg₁峰计算不低于6000。

2、对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合溶液，摇匀，即得。

3、供试品溶液的制备：取本品10g精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50mL，密塞，称定重量，加热回流2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，量取续滤液25mL蒸干，残渣加水30mL溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取5次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次30mL，再用正丁醇饱和的水30mL洗涤，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4、测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明的有益效果在于：现有技术的方法为等梯度洗脱方法，分离度较差，需分别检测Re和Rg₁，本发明的检测方法为梯度洗脱方法，分离度好，同时检测Re和Rg₁；现有技术的检测技术方法对Re和Rg₁分别进行检测，成本较高且检测时间较长，本发明的检测方法则有效解决了此问题；本发明的测定方法线性关系良好、精密度高、稳定性好、回收率高，简便、快捷并且准确可行，可作为心脑宁片药品标准中标准的定量检测方法。

附图说明

图1所示为本发明黄芪的鉴别图。