[发明专利]高灵敏高选择性检测MC-LR的核酸适配体光电化学传感器的制备方法在审

专利信息
申请号: 201510223756.7 申请日: 2015-05-06
公开(公告)号: CN104897746A 公开(公告)日: 2015-09-09
发明(设计)人: 赵国华;李修艳 申请(专利权)人: 同济大学
主分类号: G01N27/26 分类号: G01N27/26
代理公司: 上海正旦专利代理有限公司 31200 代理人: 张磊
地址: 200092 *** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 灵敏 选择性 检测 mc lr 核酸 适配体光 电化学传感器 制备 方法
【权利要求书】:

1.一种高灵敏高选择性检测MC-LR的核酸适配体光电化学传感器的制备方法,其特征在于具体步骤如下:

(1)钛板依次经过不同目数的砂纸进行机械打磨至表面呈平滑的镜面,随后依次置于去离子水、乙醇和去离子水中分别超声清洗10~20分钟,取出钛板用30~60%的HCl刻蚀10~20分钟;将完成刻蚀的钛板作为阳极,铂片作为阴极,控制两电极间距为1 cm,以含有0.1~0.3 wt%氟化铵和1~5 vol%水的乙二醇溶液为电解液,20~30℃恒温下,外加槽电压为20~40 V阳极化2 ~3小时,待阳极化完成后,取出电极用去离子水分两次超声清洗,每次清洗时间为1 分钟,干燥后得到TiONTs;

(2)以TiO2 NTs为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂片电极为对电极,50~70℃恒温条件下,于10~30mL含有0.1~0.5 mol/L的CdCl2和0.01~0.1 mol/L的Na2S2O3的混合液中, -0.3~-0.7 V电压下沉积800~1000 s;待电沉积完成后用去离子水清洗电极并自然晾干;将晾干后的经过沉积的TiO2 NTs电极置于管式炉中,于氮气气氛下500℃烧结300~400分钟晶化,升温及降温的速率均为1~5℃/分钟,制备得到硫化镉纳米粒子修饰的二氧化钛纳米管电极(CdS NPs-TiO2 NTs);用AB胶对制备的二氧化钛纳米管电极进行封和,留有1 cm×1 cm的电极面积;

(3)取CdS NPs-TiONTs电极,旋涂滴加10.0~40.0 μL 浓度为0.5~2.5% w/v壳聚糖溶液,40~60℃下干燥5~10分钟,CdS NPs-TiONTs电极干燥后依次用0.1 mol/L的NaOH、高纯水润洗并干燥后置于1%~10%的戊二醛溶液中继续反应20~40分钟;CdS NPs-TiONTs电极取出后,向CdS NPs-TiONTs电极表面滴加10~40 μL 浓度为 2.0 ×10-6 mol/L 的MC-LR适配体溶液,于4℃下培育12~18 h;用高纯水冲洗掉物理吸附的适配体后,用1~10 μL 浓度为1~3% w/v BSA对CdS NPs-TiONTs电极上剩余的醛基位点进行封端,由此制备得到核酸适配体光电化学传感器;其中,使用的MC-LR适配体的碱基序列为:

5’-H2N-GGCGC-CAAAC-AGGAC-CACCA-TGACA-

ATTAC-CCATA-CCACC-TCATT-ATGCC-CCATC-TCCGC-3’。

2.一种如权利要求1所述制备方法得到的核酸适配体光电化学传感器应用于检测MC-LR,其特征在于检测方法具体步骤如下:

以制备的核酸适配体光电化学传感器为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂电极为对电极,以含有0.1 mol/L的抗坏血酸的PBS缓冲液为电解液;配置一系列不同浓度的MC-LR标准溶液,依照标准加入法向溶液中滴加并于室温下作用10~40分钟;可见光照射下,施加0.0 V偏压,采用i~t曲线法测定含有不同浓度MC-LR的电解液的光电流,利用光电流的差值ΔI与MC-LR浓度的对数之间的线性关系建立工作曲线。

3.一种如权利要求1所述制备方法得到的核酸适配体光电化学传感器应用于选择性检测MC-LR,其特征在于选择性检测方法具体步骤如下:

以制备的核酸适配体光电化学传感器为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂电极为对电极,以MC-LR的标准溶液和100倍于MC-LR浓度的干扰物质混合液加入到电解池中作为电解液;配置一系列不同浓度的MC-LR标准溶液,依照标准加入法向溶液中滴加并于室温下作用10~40分钟;可见光照射下,施加0.0 V偏压,采用i~t曲线法测定含有不同浓度MC-LR的电解液的光电流,利用光电流的差值ΔI与MC-LR浓度的对数之间的线性关系建立工作曲线。

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于所述干扰物质包括阿特拉津、四螨嗪、啶虫脒、敌百虫、杀虫单、百草枯、草甘膦或氧乐果中任一种。

5.一种如权利要求1所述制备方法得到的核酸适配体光电化学传感器应用于实际水样中MC-LR的检测,其特征在于检测方法具体步骤如下:

以制备的核酸适配体光电化学传感器为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂电极为对电极,取实际水样依次经过滤纸过滤及0.22 μm的滤膜过滤,并加入到电解池中作为电解液,配置一系列不同浓度的MC-LR标准溶液,依照标准加入法向溶液中滴加并于室温下作用10~40分钟;可见光照射下,施加0.0 V偏压,采用i~t曲线法测定含有不同浓度MC-LR的电解液的光电流,利用光电流的差值ΔI与MC-LR浓度的对数之间的线性关系建立工作曲线;所实际水样包括自来水样,河水水样或湖水水样中任一种。

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