[发明专利]一种耐药型多发性骨髓瘤动物模型及其构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物模型，特别涉及一种用于多发性骨髓瘤生长的动物模型。该动物模型能用于在体内模式针对多发性骨髓瘤的药物活性和毒理实验，并且可用于研究多发性骨髓瘤的发病机理。

背景技术

多发性骨髓瘤，又称浆细胞骨髓瘤，是一种恶性B细胞淋巴瘤。多发性骨髓瘤患者的浆细胞恶性转变并过度分泌单克隆免疫球蛋白，多发性骨髓瘤的并发症有骨破坏，高钙血症等疾病，其中骨破坏是最常见的并发症，患者经常伴有骨溶解，骨疼痛及骨折现象。

现有治疗多发性骨髓瘤的手段主要为采用类固醇，化疗，蛋白酶抑制剂或放疗等进行缓解。多发性骨髓瘤是高发的血液肿瘤之一，患者五年存活率大约为45％。多发性骨髓瘤目前是一种无法治愈的疾病，仍然急需对于多发性骨髓瘤发病的机制和治疗手段进行改进。

对于多发性骨髓瘤的研究仍局限为体外细胞系实验和体内皮下瘤模型的抑制实验，其中，体外细胞系实验可以用于抗多发性骨髓瘤药物的筛选或多发性骨髓瘤相关分子机制的研究，但细胞系在体外培养的条件和体内实际情况差别很大，体外筛选的药物在体内环境中可能并不能有效的治疗多发性骨髓瘤。

另外，把多发性骨髓瘤细胞移植到小鼠皮下后进行动物实验可以有效的测定药物对皮下瘤大小和小鼠寿命的影响以及毒性实验，但这个模型忽略了小鼠骨髓微环境对于恶性浆细胞的作用且无法观测药物对其他并发症如骨破坏的效果，也无法用这种模型来研究多发性骨髓瘤在体内的发病机理。因此，目前需要一种新的优化的动物模型，克服上述体外模型和皮下模型的缺陷，建立模拟骨髓瘤发病情况的特点，以用来研究多发性骨髓瘤的发病机制和进行药物筛选。

发明内容

本发明的要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种耐药型多发性骨髓瘤动物模型及其构建方法。本发明是能够模仿多发性骨髓瘤发病状态的可用于体内筛选药物的新动物模型。本发明模型为小鼠体内模型，相对于骨髓瘤皮下模型，本发明模型中骨髓瘤细胞存在于骨内而非皮下，代表着多发性骨髓瘤真正的发病部位，并且可以模拟多发性骨髓瘤的并发症如骨破坏和单克隆免疫球蛋白分泌。同时，本发明模型应用耐药细胞系构建，可以模拟耐药型多发性骨髓瘤在体内的生长情况和对其他药物的反应。因此可作为针对多发性骨髓瘤药物筛选的优化体内模型并研究多发性骨髓瘤细胞在体内的发展情况和对骨细胞破坏的原理。

本发明采用的技术方案为：

一种耐药型多发性骨髓瘤动物模型，该动物模型是由包括如下步骤的方法构建得到：

1).取多发性骨髓瘤病人来源的多发性骨髓瘤耐药细胞系，备用；

2).将多发性骨髓瘤耐药细胞系于RPMI1640培养基中进行培养并添加10％胎牛血清，培养条件为5％CO₂，37℃细胞培养箱中进行培养；

3).将多发性骨髓瘤耐药细胞溶于PBS溶液中用注射器注射到NOD－SCID免疫缺陷小鼠的尾静脉中，即得该动物模型。

优选地，所述的步骤3)为将1×10⁶个多发性骨髓瘤耐药细胞溶于250μL PBS溶液中用1mL注射器注射到NOD－SCID免疫缺陷小鼠的尾静脉中，即得该动物模型。

优选地，所述的多发性骨髓瘤耐药细胞系为多发性骨髓瘤耐多柔比星细胞系。

更优选地，所述多发性骨髓瘤耐多柔比星细胞系为：RPMI 8226-DOX40(耐多柔比星细胞系)。

本发明还提供了一种耐药型多发性骨髓瘤动物模型的构建方法，包括如下步骤：

1).取多发性骨髓瘤病人来源的多发性骨髓瘤耐药细胞系，备用；

2).将多发性骨髓瘤耐药细胞系于RPMI1640培养基中进行培养并添加10％胎牛血清，培养条件为5％CO₂，37℃细胞培养箱中进行培养；

3).将多发性骨髓瘤耐药细胞溶于PBS溶液中用注射器注射到NOD－SCID免疫缺陷小鼠的尾静脉中，即得该动物模型。

优选地，上述方法中，所述的步骤3)为将1×10⁶个多发性骨髓瘤耐药细胞溶于250μL PBS溶液中用1mL注射器注射到NOD－SCID免疫缺陷小鼠的尾静脉中，即得该动物模型。

优选地，上述方法中，所述的多发性骨髓瘤耐药细胞系为多发性骨髓瘤耐多柔比星细胞系。

更优选地，上述方法中，所述多发性骨髓瘤耐多柔比星细胞系为：RPMI 8226-DOX40(耐多柔比星细胞系)。