[发明专利]用于刑侦目的的液质联用检测尿中唑吡坦中毒标记物苯基-4-羧酸唑吡坦的方法

说明书

技术领域

本发明涉及刑侦领域的毒物检测方法，特别涉及用于刑侦目的的液质联用检测尿中唑吡坦中毒标记物苯基-4-羧酸唑吡坦的方法。

背景技术

唑吡坦是第三代催眠药-非苯二氮类催眠药的代表药物之一，商品名思诺思，为咪唑并吡啶类催眠药。随着唑吡坦在临床上的应用增多，法庭科学领域中也出现了相关的案件。由于其吸收快，代谢快，检验时间短，原体不易检测。因此，研究唑吡坦及其代谢产物，明确生物转化规律，对于案件检验和法庭科学等具有重要意义。

唑吡坦化学名为N，N，6-三甲基-2-(4-甲苯基)咪唑并[1，2-a]-吡啶-3-乙酰胺，分子式C19H21N3O，分子量307，结构式如式(Ⅰ)所示。药物推荐的治疗剂量为5～10mg，其口服吸收迅速，具有很高的血浆蛋白结合率(92.5％)，可通过血脑屏障，脑脊液浓度为血浓度的30～50％，其代谢产物无药理活性，只有不到1％的原药从尿中排出。唑吡坦在体内的主要代谢产物为6-羧酸唑吡坦(Zolpidem6-carboxylic acid,ZCA)和苯基-4-羧酸唑吡坦(Zolpidem phenyl-4-carboxylic acid,ZPCA)，结构式分别如式(Ⅱ)和式(Ⅲ)所示。

唑吡坦进入体内后，对受体结合部位有高度选择性,服药后产生明显的催眠镇静作用,而副作用和不良反应则小的多。虽然这类药物安全范围较大，但大剂量服用也致中毒。中毒表现为不同程度的嗜睡、头昏、乏力，共济失调，恶心，呕吐，个别表现为兴奋，多语。严重者可引起昏迷，血压下降，休克，呼吸循环抑制，死亡等。单一的新型催眠药毒性较小，口服大量唑吡坦急性中毒死亡的，往往可同时检出其它镇静安眠药或抗抑郁药物或乙醇，因此不能确定此类药物确切的中毒量和致死量数据。

近年来在毒物分析鉴定中出现一些利用唑吡坦实施自杀、麻醉抢劫、麻醉凶杀、麻醉强奸的刑事案件。由于该药起效快消除快的代谢特点，给痕量检测提出了较高的要求。

唑吡坦的消除半衰期很短，仅有0.7～3.5h，因此服用24～48h后很少有机会检出唑吡坦。在麻醉抢劫案件中，尿液是最常用的检材样品之一，由于毒物在尿液中具有更长的检验时间窗口，因此尿液比血液或血清等更具有特殊优势。但是，现有技术中还没有针对尿液中苯基-4-羧酸唑吡坦的检测方法，尤其是没有灵敏度高、检出限低的检测方法。

发明内容

有鉴于此，本发明在于提供一种灵敏度高、检出限低的用于刑侦 目的的液质联用检测尿中唑吡坦中毒标记物苯基-4-羧酸唑吡坦的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：用于刑侦目的的液质联用检测尿中唑吡坦中毒标记物苯基-4-羧酸唑吡坦的方法，包括如下步骤：

(1)将尿液样品处理后得到待检测液；

(2)利用液相色谱-串联质谱联用仪检测步骤(1)得到的待检测液中的苯基-4-羧酸唑吡坦。 

上述方法，在步骤(2)中，液相色谱的色谱柱为：a)色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18RRHD柱，2.1mm×100mm，1.7μm；或者b)色谱柱：ACQUITY UPLC HELIC柱，2.1mm×100mm,1.7μm。

上述方法，在步骤(2)中，液相色谱的流动相为如下任意一种组合：

流动相组合一：由A相和B相组成，A相为水，B相为乙腈；

流动相组合二：由A相和B相组成，A相为乙腈的体积分数为0.05％、甲酸的体积分数为0.1％且水的体积分数为99.85％的混合溶液2A；B相为水的体积分数为0.05％、甲酸的体积分数为0.1％且乙腈的体积分数为99.85％的混合溶液2B；

流动相组合三：由A相和B相组成，A相为水的体积分数为95％且甲酸乙腈溶液A的体积分数为5％的混合溶液3A，其中在甲酸乙腈溶液A中甲酸的体积分数为1％，并且混合溶液3A中还加入了乙酸铵浓度为20mmol/L的乙酸铵溶液；B相为水的体积分数为5％且甲酸乙腈溶液B的体积分数为95％的混合溶液3B，其中在甲酸乙腈溶液B中，甲酸的体积分数为1％。

上述方法，在步骤(2)中，液相色谱的流动相梯度洗脱条件为如下三种流动相梯度洗脱条件中的任意一种：

流动相梯度洗脱条件一，以流动相B的比例进行说明：初始体积10％保持0.4min后，2.2min增至50％保持0.3min，2.6min下降至10％并保持2min；