[发明专利]Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用

权利要求书

1.一种Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用。

2.根据权利要求1所述的Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用，所述Lunasin是通过PPARγ通路抑制小鼠前体脂肪细胞(3T3-L1)分化而制备的具有减肥活性物质。

3.根据权利要求1或2所述的Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用，所述活性物质包括Lunasin多肽和常用的制剂辅料。

4.根据权利要求1或2所述的Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用，包括

第一步，MTT法检测不同剂量的Lunasin对3T3-L1脂肪细胞活性的影响；

或，还包括：

第二步，在对脂肪细胞活性无影响剂量下，研究不同剂量Lunasin对脂肪细胞分化的抑制作用；

然后，

第三步，观察细胞内脂滴堆积状况；提取细胞总RNA并进行逆转录，检测PPARγ的mRNA表达。

5.根据权利要求4所述的Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用，所述MTT法测定Lunasin对3T3-L1小鼠前体脂肪细胞活性影响，加入Lunasin浓度为12.5μg/ml-800μg/ml。

6.根据权利要求4所述的Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用，所述Lunasin对3T3-L1小鼠前体脂肪细胞分化的影响，加入Lunasin浓度为12.5μg/mL-100μg/mL。

7.根据权利要求4所述的Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用，所述第三步的观察为油红染色后，观察细胞内脂滴堆积状况；异丙醇提取，测吸光度；提取脂肪细胞总RNA，逆转录，RT-PCR检测PPARγ的mRNA表达量，进一步确定其机理。

8.根据权利要求7所述的Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用，所述mRNA表达量是以5μg/mL罗格列酮作为阳性对照组。

9.根据权利要求5所述的Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用，所述MTT法测定Lunasin对3T3-L1脂肪细胞活性的影响，包括：3T3-L1前体脂肪细胞复苏传代后，以10000个细胞/ml密度，接种于96孔板，24h后，更换含有12.5μg/mL-100μg/mL Lunasin的培养基，设置无细胞无lunasin空白组和无Lunasin阴性对照组；48h后每孔加入20μL MTT溶液(1mg/mL),37℃厌氧孵化4h，移除MTT后，使用200μL DMSO溶解结晶，570nm下测定吸光度。

10.根据权利要求6所述的Lunasin多肽在制备具有减肥活性物质方面的应用，将3T3-L1前体脂肪细胞以10000个细胞/mL密度接种于12孔板，生长融合后，再培养48h,加诱导液Ⅰ，所述诱导液Ⅰ含10％胎牛血清(FBS)，1％双抗，10μg/ml胰岛素，0.5m M异丁甲基黄嘌呤(IBMX)和0.1μM地塞米松(DEX)的DMEM培养基，培养48h；更换为诱导液Ⅱ，所述诱导液Ⅱ含5μg/ml胰岛素的DMEM培养基，培养48h；更换为含有12.5μg/mL-100μg/ml Lunasin的DMEM培养基，并以5μg/ml罗格列酮作为阳性对照组，不加lunasin作为空白对照组。