[发明专利]基于BCG1抗原的DC细胞、靶向性免疫细胞群及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种制备DC细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将单核细胞进行第一诱导分化培养，以便获得未成熟的DC细胞；

利用BCG1抗原mRNA转染所述未成熟的DC细胞，以便获得经过转染的未成熟DC细胞；以及

将所述经过转染的未成熟DC细胞进行第二诱导分化培养，以便获得成熟的DC细胞，

其中，所述单核细胞是从样本的外周血单个核细胞中分离获得的。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述BCG1抗原mRNA是通过以下步骤获得的：

制备BCG1抗原cDNA质粒，所述BCG1抗原cDNA的核酸序列如SEQ ID NO：1所示；

将所述BCG1抗原cDNA质粒进行线性化处理，以便获得经过线性化处理的BCG1抗原cDNA质粒；以及

将所述经过线性化处理的BCG1抗原cDNA质粒进行体外转录，以便获得BCG1抗原mRNA。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以pcDNA3.1载体为骨架载体，制备所述BCG1抗原cDNA质粒，

任选地，所述pcDNA3.1载体具有BamhI、XbaI和Bst1107I酶切位点，

任选地，基于酶切位点Bst1107I进行所述线性化处理，

任选地，利用T7Message Machine试剂盒进行所述体外转录，

任选地，在进行所述体外转录后，进一步包括除杂纯化的步骤。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用电转或PEI法进行所述转染，

任选地，利用PEI法进行所述转染，其中，PEI与所述BCG1抗原mRNA的混合质量比为3:1，

任选地，利用DC培养基进行所述第一诱导分化培养和所述第二诱导分化培养，

任选地，所述DC培养基包含：

无血清细胞培养基；

100～1000U/ml的CTL4因子；以及

2体积％～10体积％的自体血清，

其中，所述血清来源于所述样本，

任选地，所述无血清培养基为Takara的无血清培养基，

任选地，所述无血清培养基中添加有0.5体积％～5体积％的抗生素，优选庆大霉素，

任选地，进行所述第一诱导分化培养4-5天，每2-3天半换液一次，

任选地，进行所述第二诱导分化培养4-5天，每2-3天半换液一次。

5.一种制备靶向性免疫细胞群的方法，其特征在于，包括以下步骤：

提供样本的外周血单个核细胞；

将所述样本的外周血单个核细胞分离为淋巴细胞和单核细胞；

将所述淋巴细胞进行活化培养，以便获得经过活化培养的淋巴细胞；

将单核细胞进行第一诱导分化培养，以便获得未成熟的DC细胞；

利用BCG1抗原mRNA转染所述未成熟的DC细胞，以便获得经过转染的未成熟DC细胞；

将所述经过转染的未成熟DC细胞进行第二诱导分化培养，以便获得成熟的DC细胞；以及

将所述成熟的DC细胞与所述经过活化培养的淋巴细胞进行混合培养，以便获得靶向性免疫细胞群。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述BCG1抗原mRNA是通过以下步骤获得的：

制备BCG1抗原cDNA质粒，所述BCG1抗原cDNA的核酸序列如SEQ ID NO：1所示；

将所述BCG1抗原cDNA质粒进行线性化处理，以便获得经过线性化处理的BCG1抗原cDNA质粒；以及

将所述经过线性化处理的BCG1抗原cDNA质粒进行体外转录，以便获得BCG1抗原mRNA，

任选地，以pcDNA3.1载体为骨架载体，制备所述BCG1抗原cDNA质粒，

任选地，所述pcDNA3.1载体具有BamhI、XbaI和Bst1107I酶切位点，

任选地，基于酶切位点Bst1107I进行所述线性化处理，

任选地，利用T7Message Machine试剂盒进行所述体外转录，

任选地，在进行所述体外转录后，进一步包括除杂纯化的步骤。