[发明专利]一种酶解蛋白质的方法

权利要求书

1.一种酶解蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、制备工作电极，工作电极为氧化还原酶和锌铝层状双氢氧化物修饰的电极；

步骤二、将蛋白质加水搅拌均匀，倒入电泳槽的阴极，在80-120V电压下电泳，电泳结束后在电泳槽的阳极收集蛋白质溶液；

步骤三、将步骤二中所得的蛋白质溶液加入到所述酶解缓冲溶液中，其中，蛋白质和酶解缓冲溶液的质量比为1:20-30，所述酶解缓冲溶液由碳酸氢铵、三氟乙醇和乙腈按质量比为2:40-60:8-15组成，并用超声波处理3-5分钟；

步骤四、在步骤三中所得蛋白质溶液中加入6-15mmol/L的二硫苏糖醇，在55-65℃下静置30-60分钟；

步骤五、在步骤四中所得蛋白质溶液中加入15-25mmol/L的碘乙酰胺，在室温下静置20-40分钟；

步骤六、在步骤五中所得蛋白质溶液中加入40mmol/L碳酸氢铵调节pH至8；

步骤七、在步骤六中所得蛋白质溶液中加入占整个溶液体积90％-98％胰蛋白酶，在50℃-60℃下酶解3.5-4.5h，即可获得酶解后的多肽产物。

2.如权利要求1所述的酶解蛋白质的方法，其特征在于，当利用超声波处理步骤三中的溶液时，每处理10-15秒，间歇4-6秒。

3.如权利要求1所述的酶解蛋白质的方法，其特征在于，将步骤七中的酶解液在90℃下灭酶处理18-20分钟。

4.如权利要求1所述的酶解蛋白质的方法，其特征在于，所述工作电极的制备方法为：

步骤a、对玻碳电极进行预处理；

步骤b、取氧化还原酶溶于乙醇，超声混合，得到混合液，取5μL混合液滴到步骤a得到的玻碳电极表面，然后红外干燥烘干，冷却至室温备用；

步骤c、将锌铝层状双氢氧化物包覆于步骤b得到的电极表面，在140℃下加热处理6-8小时，即得所述工作电极。