[发明专利]一种防止黄花蒿组织培养褐化的方法

权利要求书

1.一种防止黄花蒿组织培养褐化的方法，其特征在于，取消毒后的黄花蒿的幼嫩茎段，将黄花蒿的幼嫩茎段浸泡于浓度为1.8～2.2g/L的可溶性聚乙烯吡咯烷酮溶液10～15min。

2.如权利要求1所述的防止黄花蒿组织培养褐化的方法，其特征在于，所述的可溶性聚乙烯吡咯烷酮溶液为通过孔径为0.20～0.24μm的滤膜灭菌后的可溶性聚乙烯吡咯烷酮溶液。

3.如权利要求2所述的防止黄花蒿组织培养褐化的方法，其特征在于，将浸泡后的黄花蒿的幼嫩茎段接种于MS诱导液体培养基进行诱导培养，所述的MS诱导液体培养基包括：MS、1.0～2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.3～0.6mg/L的萘乙酸、100～200mg/L的维生素C和0.1～0.5g/L的活性炭。

4.如权利要求3所述的防止黄花蒿组织培养褐化的方法，其特征在于，调节所述的MS诱导液体培养基的pH值为5.3～5.7。

5.如权利要求4所述的防止黄花蒿组织培养褐化的方法，其特征在于，在进行诱导培养之前，将黄花蒿的幼嫩茎段接种于MS预培养固体培养基进行预培养，重复2～3次，所述的MS预培养固体培养基包括：MS、4.5g/L琼脂、30g/L蔗糖。

6.如权利要求5所述的防止黄花蒿组织培养褐化的方法，其特征在于，在黄花蒿的幼嫩茎段浸泡于聚乙烯吡咯烷酮溶液前，用浸泡过土豆的清水涂覆黄花蒿的幼嫩茎段表面，风干后用黑色罩布蒙住，置于磁场强度为100～200mT的磁场中磁化处理8～10min。

7.如权利要求6所述的防止黄花蒿组织培养褐化的方法，其特征在于，黄花蒿的幼嫩茎段进行预培养期间，依次接种于分别添加有10～15g鱼腥草、10～15g核桃粒、10～15g蜂蜜的MS预培养固体培养基中，每次培养5～10天。

8.如权利要求7所述的防止黄花蒿组织培养褐化的方法，其特征在于，将黄花蒿的幼嫩茎段接种于MS诱导液体培养基后，送入24～27℃的摇床内，转速为100～120r/min，培养5～10min，然后培养5～10天。

9.如权利要求8所述的防止黄花蒿组织培养褐化的方法，其特征在于，黄花蒿的幼嫩茎段进行预培养时，控制温度为24～27℃，光照强度为1500lux，光照时间为10～12小时/天；黄花蒿的幼嫩茎段进行诱导培养时，控制温度为24～27℃，光照强度为2000lux，光照时间为10～12小时/天。

10.如权利要求1所述的防止黄花蒿组织培养褐化的方法，其特征在于，黄花蒿的幼嫩茎段的消毒操作为：依次用1％洗洁精水溶液浸泡3～5min，线状自来水冲洗10～15min，用经高压灭菌的无菌水润洗一次，用75％体积分数的酒精浸泡30～50s，再用添加了2～3滴吐温-20的150mL，0.1％体积分数的升汞消毒6～8min，用经高压灭菌的无菌水润洗3～5次，最后去除表面水分。