[发明专利]一种商陆活性组分的提取工艺及其含量的测定方法

权利要求书

1.一种具有护肾功能的商陆活性组分的提取方法，其特征在于，其提取方法包括如下步骤：

步骤一、取商陆饮片200～300kg，先加入商陆饮片5～8倍质量的纯化水，在室温下浸泡1～2h，然后滤过；对残渣加入5～8倍质量的甲醇，加热回流1～2h，趁热过滤；将两次滤液合并得到商陆滤液；

步骤二、将步骤一得到的残渣加入8～10倍质量的纯化水，加热煮沸；通过水蒸气蒸馏提取2～3次，每次1.5～2h；滤过，合并提取液得到商陆提取液；

步骤三、将步骤一的商陆滤液和步骤二的商陆提取液合并得到混合溶液，在其中加入硅油10～30L，对混合溶液进行浓缩，浓缩至150～200L；用高速离心机将浓缩液离心，静置1～2h，取离心上层液；在下层离心液中加入50～100L热水，再次用高速离心机离心，静置1～2h，取离心上层液；所述硅油为甲基硅油、乙基硅油、苯基硅油、甲基苯基硅油、甲基氯苯基硅油、甲基乙氧基硅油、甲基羟基硅油中的至少一种或其混合物；

步骤四、合并两种离心上层液，加入苯甲醇15～50L、甲醇10～20L，搅拌均匀；然后加水制成260～300L，搅匀，静置12～15小时；当测定其相对密度不小于1.01，pH值在5.0～6.5范围内时，即得商陆活性组分溶液；其中，经过提取后获得的护肾活性组分中多糖成分质量含量为50％以上，皂苷类成分质量含量为40％以上。

2.如权利要求1所述的提取方法提取的商陆活性组分的含量测定方法，其特征在于：包括多糖成分的含量测定方法和皂苷类成分的含量测定方法；

其中多糖成分的含量测定方法包括如下步骤：

(1)待测样品溶液的制备：吸取商陆活性组分溶液0.1mL，用纯化水稀释至1～1.5mL；加入浓度为4～5％的苯酚1～1.5mL，摇匀；再加入苯甲醇与碳酸氢钾水溶液的混合溶液1.0～1.2mL，其中苯甲醇与碳酸氢钾水溶液的体积比为55～68:32～45，碳酸氢钾水溶液的质量浓度为30～45％，混合均匀；加入浓硫酸4～6mL，充分混合均匀；置于沸水浴中加热30～50min，冷却至室温，得到待测样品溶液；

(2)测定波长选择：用紫外分光光度计在100-900nm波长范围内对待测样品进行扫描，测定其吸收曲线，确定商陆多糖的检测波长为490nm；

(3)葡萄糖对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖对照品2.49～2.60mg，用纯化水溶解，定容至25mL，配制成质量浓度为0.1mg/mL葡萄糖对照品溶液；

(4)标准曲线的绘制：精密吸取0.1mg/mL的葡萄糖对照品溶液5mL，分别加入纯化水通过倍比稀释法稀释8～12个浓度，配制成不同浓度的对照品溶液；再吸取不同浓度的对照品溶液；分别采用紫外分光光度计在490nm波长进行检测，以测得的吸光值为纵坐标，以相应葡萄糖对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得标准曲线线性回归方程；

(5)待测样品溶液的紫外检测：以随行试剂为空白，吸取待测样品溶液，用紫外分光光度计在490nm波长下检测；

(6)待测样品溶液浓度的计算：将步骤(5)中测得的吸光值作为测量值，代入标准曲线线性回归方程，计算出待测样品中商陆多糖的浓度；

皂苷类成分的含量测定方法包括如下步骤：

(1)待测样品溶液的制备：吸取商陆活性组分溶液1mL，置于具塞试管中；加入0.5～0.8mL香草醛的浓硝酸溶液，其中香草醛的浓硝酸溶液的质量浓度为30～50％；置60～70℃水浴上充分混匀后加热10～15min，立即用冰水冷却，加入硫酸溶液5ml，摇匀；

(2)测定波长的选择：用紫外分光光度计在100-900nm波长范围内对待测样品进行扫描，测定其吸收曲线确定商陆总皂苷的检测波长为469nm；

(3)商陆皂苷甲对照品溶液的制备：精密称取商陆皂苷甲对照品27.50mg，用甲醇定容至25mL，配制成质量浓度为1mg/mL的对照品溶液，备用；

(4)标准曲线的绘制：精密吸取1mg/mL的商陆皂苷甲对照品溶液5mL，分别加入纯化水通过倍比稀释法稀释5～8个浓度，配制成不同浓度的对照品溶液；再吸取不同浓度的待测样品溶液分别采用紫外分光光度计在469nm波长进行检测，以测得的吸光值为纵坐标，以相应商陆皂苷甲对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得标准曲线线性回归方程；

(5)待测样品的紫外检测：以随行试剂为空白，吸取供试品溶液，用紫外分光光度计在469nm波长下检测；

(6)待测样品浓度的计算：将步骤(2)中测得的吸光值作为测量值，代入标准曲线线性回归方程，计算出待测样品中商陆总皂苷的浓度。