[发明专利]一种高效检测禽肉中哌嗪残留的方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种高效检测禽肉中哌嗪残留的方法。

背景技术

目前国内外对哌嗪的残留检测方法主要有重量分析法、比色法、非水滴定法、气相色谱法、高效液相色谱法和高效液相色谱-串联质谱法等。重量分析法、比色法和非水滴定法不适合生物样品中哌嗪的检测，灵敏度较低。哌嗪无发光基团，不能直接被紫外检测器和荧光检测器检测，需要进行衍生化反应使其携带发光基团，试验步骤繁琐，且衍生化产物不稳定，所得数据误差较大。到目前为止，应用高效液相色谱法(HPLC)和高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)对猪组织、牛组织、鸡蛋、蜂蜜中哌嗪残留检测方法虽有报道，但检测猪组织、牛组织、鸡蛋、蜂蜜和禽肉中哌嗪残留的超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)的研究尚未见报道。

发明内容

为了能检测并确证哌嗪在禽肉中的残留，满足欧盟标准，本发明提供了一种超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)，能快速、高效地检测禽肉中哌嗪的残留。

本发明所采用的技术方案是：一种高效检测禽肉中哌嗪残留的方法，是将禽肉经过提取和净化后，超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测。以0.1％甲酸水溶液-甲醇为流动相，流速为0.2mL/min，梯度洗脱，进样量为5.0μL。采用电喷雾正离子模式电离(ESI⁺)，多反应监测模式扫描(MRM)，外标法定量分析。

所述的禽肉提取和净化是以5.0％三氯乙酸水溶液和乙腈的混合溶液为提取剂处理禽肉样品得提取液，提取液中加入乙腈饱和的正己烷去除脂肪后，用固相萃取法净化。具体可采用下述操作：将禽肉样品均质后，加入5.0％三氯乙酸水溶液和乙腈混合溶液(体积比3:1)振荡、混匀直接提取，离心，将上清液转移。重复提取1-2次，合并上清液，即得提取液。

向提取液中加入乙腈饱和的正己烷去除脂肪后，过混合阳离子固相萃取小柱(Strata-X-C)，先依次用甲醇、超纯水、2.0％甲酸水溶液将SPE小柱活化平衡，上样后待提取液匀速流干后，再依次用2.0％甲酸水溶液、超纯水、甲醇淋洗，待小柱干燥后，最终用10.0％氨水乙腈进行洗脱。最后洗脱液用氮气吹干，上机前用2.0mL 20.0％甲醇水溶液涡旋振荡溶解残渣，转移2.0mL复溶液至离心管中，常温离心10min，将上层清液过0.22μm滤膜，滤液供UPLC-MS/MS测定分析。

本发明在回收率、精密度和灵敏度三个方面与其他检测方法进行比较，本方法具有简单、快速、准确和灵敏的优点。

附图说明

图1哌嗪的电喷雾一级质谱扫描图。

图2哌嗪的电喷雾二级质谱扫描图。

图3鸡肌肉中哌嗪的基质添加标准曲线。

图4空白鸡肌肉的总离子流色谱图(TIC)和提取离子色谱图(XIC)。

图5空白鸡肌肉样品添加1μg/kg(LOQ)标准品的总离子流色谱图(TIC)和提取离子色谱图(XIC)。

具体实施方式

在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。

本发明中所涉及到的溶液百分浓度，除特别说明外均为质量百分浓度。

1.实验家禽的饲养和样品采集

分别选取销往各活禽农贸市场和超市的上市日龄肉用家禽，即16周龄京海黄鸡、10周龄扬州鹅和8周龄樱桃谷鸭各12羽，公、母各半，单笼饲养，饲喂不含任何药物的全价饲料，自由饮水。饲养2周后屠宰时分别取两侧胸肌作为空白肌肉样品，-35℃保存，使用时将该样品绞碎使之均质。

2.本发明提取与净化步骤

1)用粉碎机将禽肉均质；

2)准确称取(2.0±0.02)g均质好的空白禽肉样品，置于50.0mL聚丙烯带盖离心管内；

3)加入6.0mL 5.0％三氯乙酸水溶液和2.0mL乙腈，涡旋混匀2min，水浴超声振荡辅助萃取10min；

4)以12000×g，4℃离心10min，将上清液转移至另一50.0mL离心管中；