[发明专利]用于甘蓝Ogura胞质不育系育性恢复基因Rfo筛选的PCR标记有效
| 申请号： | 201510230662.2 | 申请日： | 2015-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN104805212B | 公开（公告）日： | 2017-03-22 |
| 发明（设计）人： | 张扬勇;于海龙;方智远;杨丽梅;庄木;刘玉梅;吕红豪;李占省 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司11129 | 代理人： | 吴泳历 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 甘蓝 ogura 不育 系育性 恢复 基因 rfo 筛选 pcr 标记 | ||
1.用于甘蓝Ogura胞质不育系育性恢复基因Rfo筛选的PCR标记，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.用于甘蓝Ogura胞质不育系育性恢复基因Rfo筛选的引物，其核苷酸序列为：
上游引物BnRFO-2F3：5’-GCAGGGATGGAGAGAGTTGCG-3’，
下游引物BnRFO-2R：5’-TACGACATTGGGCCTACATGTC-3’。
3.用于甘蓝Ogura胞质不育系育性恢复基因Rfo辅助筛选的方法，包括如下步骤：
(1)以待测甘蓝为材料，提取样品的基因组DNA；
(2)以步骤(1)获得的基因组DNA为模板，采用权利要求2所述的引物进行PCR反应，获得PCR产物；
(3)琼脂糖凝胶电泳检测步骤(2)获得的PCR产物，若PCR产物中出现458bp的特征条带，则所述样品中含有育性恢复基因Rfo；若PCR产物的大小不是458bp，则所述样品中不含有育性恢复基因Rfo。
4.根据权利要求3所述的方法，所述PCR反应的体系为：PCR反应体积为15μL，其中包括含15mmol/L MgCl2的10×Buffer 1.5μL，2.5mmol/L dNTP各1.2μL，10μmol/L上下游引物各0.5μL，5U/μL Taq酶0.15μL，20ng/μL模板DNA 3μL，ddH2O 13.15μL。
5.根据权利要求3或4所述的方法，所述PCR反应的条件为：94℃预变性4min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸45s，35个循环；72℃延伸7min。
6.用于甘蓝Ogura胞质不育系育性恢复基因Rfo辅助筛选的试剂盒，其特征在于：包括液态的或粉状的用于甘蓝Ogura胞质不育系育性恢复基因Rfo筛选的引物，其核苷酸序列为：
上游引物BnRFO-2F3：5’-GCAGGGATGGAGAGAGTTGCG-3’，
下游引物BnRFO-2R：5’-TACGACATTGGGCCTACATGTC-3’。
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