[发明专利]检测呼吸道感染相关病原微生物的系统及其专用LAMP引物

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中检测呼吸道感染相关病原微生物的系统及其专用LAMP引物。

背景技术

肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、结核分枝杆菌复合群、肺炎支原体和肺炎衣原体这十三种病原菌是呼吸道感染的常见病原菌。呼吸道感染是我国临床上最常见的疾病之一，重症肺炎若不能及时、正确用药，容易危及生命。然而，临床常规的生化指标分析无法对患者所感染的病原菌种做出准确鉴定，大多数临床治疗仍处于经验用药阶段，在使用高级抗生素方面存在较大的盲目性。目前临床上流行使用的相对比较科学地鉴定病原菌的方法主要是依靠细菌培养检测法，但是细菌培养检测法存在较大的缺陷：检测时间长(一般两天左右)、准确率低(假阴性率和假阳性率都较高)、难以检测出难培养的病原体等。

环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是利用一种具有链置换活性和瀑布式核酸扩增功能的Bst DNA聚合酶，在等温条件下进行核酸的变性和自动循环的链置换核酸扩增反应。LAMP针对靶序列的6个区域设计4条特异引物，利用具备链置换功能的DNA聚合酶在恒定温度下不断复制扩增DNA。为了提高反应效率，可在反应体系中添加两条环引物，使之分别与茎环结构结合，启动链置换合成，循环复制。

LAMP具有简便、快速、灵敏、特异的优势，尤其适合在基层开展LAMP试剂盒的应用推广。LAMP技术中，引物是决定检测结果灵敏度和特异性的关键因素。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测呼吸道感染相关病原微生物的种类。

本发明首先提供了检测呼吸道感染相关病原微生物的系统及其专用LAMP引物。

本发明所提供的检测呼吸道感染相关病原微生物的环介导等温扩增的成套引物，为下述十三个引物组中的十三组、任十二组、任十一组、任十组、任九组、任八组、任七组、任六组、任五组、任四组、任三组、任两组或任一组：用于检测肺炎链球菌的引物组、用于检测金黄色葡萄球菌的引物组、用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的引物组、用于检测大肠埃希氏菌的引物组、用于检测肺炎克雷伯菌的引物组、用于检测铜绿假单胞菌的引物组、用于检测鲍曼不动杆菌的引物组、用于检测嗜麦芽窄食单胞菌的引物组、用于检测流感嗜血杆菌的引物组、用于检测嗜肺军团菌的引物组、用于检测结核分枝杆菌复合群的引物组、用于检测肺炎支原体的引物组和用于检测肺炎衣原体的引物组；所述用于检测肺炎链球菌的引物组为肺炎链球菌正义6引物组、肺炎链球菌反义6引物组、肺炎链球菌正义4引物组或肺炎链球菌反义4引物组。

本发明提供的成套引物中所述肺炎链球菌正义6引物组由肺炎链球菌引物F3-Z、肺炎链球菌引物B3-Z、肺炎链球菌引物FIP-Z、肺炎链球菌引物BIP-Z、肺炎链球菌引物LF-Z和肺炎链球菌引物LB-Z这6条引物组成；所述肺炎链球菌反义6引物组由肺炎链球菌引物F3-F、肺炎链球菌引物B3-F、肺炎链球菌引物FIP-F、肺炎链球菌引物BIP-F、肺炎链球菌引物LF-F和肺炎链球菌引物LB-F这6条引物组成；所述肺炎链球菌正义4引物组由所述肺炎链球菌引物F3-Z、所述肺炎链球菌引物B3-Z、所述肺炎链球菌引物FIP-Z和所述肺炎链球菌引物BIP-Z这4条引物组成；所述肺炎链球菌反义4引物组由所述肺炎链球菌引物F3-F、所述肺炎链球菌引物B3-F、所述肺炎链球菌引物FIP-F和所述肺炎链球菌引物BIP-F这4条引物组成。

本发明提供的成套引物中所述肺炎链球菌引物F3-Z是如下a1)至a2)中的任一种单链DNA：

a1)SEQ ID No.1的第6-25位核苷酸的单链DNA；

a2)与a1)限定的单链DNA片段具有85％以上的同一性的单链DNA片段。

本发明提供的成套引物中所述肺炎链球菌引物B3-Z是如下a4)至a5)中的任一种单链DNA：

a4)SEQ ID No.1的第213-229位核苷酸的反向互补单链DNA；

a5)与a4)限定的单链DNA片段具有85％以上的同一性的单链DNA片段。

本发明提供的成套引物中所述肺炎链球菌引物FIP-Z是如下a7)至a8)中的任一种单链DNA：