[发明专利]用于弓形虫感染预防的核苷酸序列及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及用于弓形虫感染预防的核苷酸序列及其应用。

背景技术

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种全球分布的顶复门原虫(Apicomplexa)，能够入侵包括人类在内的几乎所有的有核温血动物。据报道，世界上有三分之一的人群感染弓形虫，大多数人呈隐形感染，但免疫力低下或免疫缺陷(HIV携带者，器官移植者等)病人感染弓形虫却可引起严重的后果。弓形虫急性暴发流行时还可给畜牧业造成严重的经济损失。目前仍未有治疗弓形虫病的理想药物，因此研制安全有效的抗弓形虫疫苗在弓形虫病的防治中显得尤为重要。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了用于弓形虫感染预防的核苷酸序列及其应用，该核苷酸序列能够用于制备弓形虫感染预防的疫苗。

本发明提供用于弓形虫感染预防的核苷酸序列，其含有选自以下1)-6)之一的核苷酸序列：

1)序列表中SEQ ID No.1中所示的核苷酸序列；

2)序列表中SEQ ID No.1中所示的核苷酸序列和IL15的核苷酸序列；

3)序列表中SEQ ID No.1中所示的核苷酸序列，和序列表中SEQ ID No.2中所示的核苷酸序列，和序列表中SEQ ID No.3中所示的核苷酸序列，和序列表中SEQ ID No.4中所示的核苷酸序列，和序列表中SEQ ID No.5中所示的核苷酸序列；

4)序列表中SEQ ID No.2中所示的核苷酸序列，和序列表中SEQ ID No.3中所示的核苷酸序列，和序列表中SEQ ID No.4中所示的核苷酸序列，和序列表中SEQ ID No.5中所示的核苷酸序列；

5)与1)-4)任一所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列；

6)对上述1)-4)任一所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列。

本发明的第二个目的是提供重组载体，其包括权利要求1所述的核苷酸序列。

优选地，所述载体为PVAX1载体。

本发明的第三个目的是提供重组质粒，其包括权利要求1所述核苷酸序列。

本发明的第四个目的是提供重组蛋白，其氨基酸序列由权利要求4所述的重组质粒编码。

本发明的第五个目的是提供一种疫苗，其包括权利要求1所述的核苷酸序列。

优选地，所述疫苗还包括医学上可接受的载体。

本发明的第六个目的是提供上述核苷酸序列、重组载体、重组质粒、重组蛋白、疫苗在制备用于弓形虫感染预防的药物中的应用。

本申请人研究发现：弓形虫Profilin蛋白是弓形虫入侵宿主细胞过程中的关键蛋白之一，Profilin蛋白是肌动蛋白动力的调制器，能促进肌动蛋白的聚集，影响弓形虫的滑行运动，是调节弓形虫动力的关键蛋白。此外它还能被Toll样受体11(TLR11)识别，是TLR11的强效激动剂，而TLR11在白介素12(IL-12)的分泌过程中起着重要作用。本发明中将弓形虫Profilin基因制备成弓形虫核酸疫苗pVAX-profilin，并与弓形虫疫苗pVAX-rop16、pVAX-rop18、pVAX-MIC6、pVAX-CDPK3及pVAX-IL15联合应用进行抗弓形虫感染免疫效果评估。结果显示该疫苗以及联合疫苗均能有效抑制弓形虫脑包囊的产生，取得了较好的免疫效果。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

实施例1

(一)弓形虫RH株pVAX-profilin的制备

1.从液氮中取出弓形虫RH虫株，37℃水浴解冻，腹腔注射昆明小鼠，连续3次传代后，分别收集感染RH虫株小鼠的腹水于1.5mL灭菌离心管中，室温6000rpm离心10min，弃去上清液，置于-80℃冰箱保存沉淀用于提取RNA。按照Total RNA Kit I(购自Omega公司)的操作说明提取重组总RNA。

2.Profilin基因的扩增：

2.1引物设计

参照弓形虫profilin基因序列，设计了扩增弓形虫profilin基因的引物序列，包括：

上游：5'-CGGGGTACCATGTCCGACTGGGACCCTGTTGTCAAGG-3'，