[发明专利]一种多基因叠加顺式表达的酵母载体及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201510237093.4 | 申请日： | 2015-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN104830893A | 公开（公告）日： | 2015-08-12 |
| 发明（设计）人： | 徐玉泉;王晓婧;张维;刘航 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 11129 | 代理人： | 张涛 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 多基因 叠加 顺式 表达 酵母 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种可用于多个基因叠加顺式表达的载体，其特征是：含有两对同尾酶的限制性内切酶酶切位点序列，且通过这两对同尾酶可以实现多个基因叠加在同一个表达载体上；所用的表达载体源于酵母表达载体、pET系列的原核表达载体或真核表达载体pEGFP。
2.权利要求1所述的载体，所述两对同尾酶选自以下同尾酶对中的两对：Xho I/Sal I、BamH I/Bgl II、Xba I/Nhe I、Spe I/Nhe I或Xba I/Spe I。
3.权利要求1所述的载体，所用的表达载体是酵母表达载体，选自pRS425、pRS423、pRS426、pRS316或pRS403。
4.权利要求3所述的载体，载体基因表达盒所用的启动子和终止子是乙醇脱氢酶ADH2的启动子ADH2p和终止子ADH2t。
5.权利要求4所述的载体，所用的表达载体是酵母表达载体pRS425。
6.一种构建多个基因叠加顺式表达载体的方法，其特征是：在启动子上游和终止子下游分别引入限制性内切酶识别序列。
7.权利要求6所述的方法，首先在待改造的表达载体上加入启动子和终止子，再通过PCR定点突变的方法分别在启动子上游和终止子下游引入限制性内切酶识别序列。
8.权利要求6所述的方法，首先在酵母表达载体pRS425上加入乙醇脱氢酶ADH2的启动子ADH2p和终止子ADH2t，再通过PCR定点突变的方法在启动子ADH2p上游引入Sal I内切酶识别序列，在终止子ADH2t下游引入BamH I和Bgl II两个内切酶识别序列，最终得到用于多个基因叠加顺式表达的酵母表达载体。
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