[发明专利]五月瓜藤种苗的培养方法

说明书

技术领域

本发明属于植物细胞工程技术领域，具体涉及一种利用植物组织培养方式综合处理进行五月瓜藤培养快繁以获得大量种苗的方法。

背景技术

五月瓜藤（Holboellia fargesii Reaub.）为木通科（Lardizabalaceae）八月瓜属（Holboellia）植物，产于云南、贵州、四川、湖北、湖南、陕西、安徽、广西、广东和福建。野生分布于海拔500-3000米的山坡杂木林及沟谷林中。五月瓜藤为常绿木质藤本植物，花雌雄同株，红色紫红色暗紫色绿白色或淡黄色，数朵组成伞房式的短总状花序，具有较高观赏价值，可作为垂直绿化材料进行栽培；其花期4-5月，果期7-8月，果实表皮紫色，长圆形，长5-9厘米，果肉甘甜，可作为水果种植；另外其种子含油40％，可榨油，作为油料作物；此外其根药用，治劳伤咳嗽，果治肾虚腰痛、疝气等。由此可见五月瓜藤具有很高的应用价值，具有极大的开发潜力。

由于生态环境的破坏和掠夺式的采摘挖掘，五月瓜藤的资源日趋缩小，严重影响了其有序的开发利用，因此需要对其进行种苗繁殖技术的开发。

利用植物组织培养的方式进行五月瓜藤种苗的培养快繁是一种较好的规模化获得五月瓜藤种苗的方法，且该方法未见报道和公开应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种生长周期短、移栽存活率高、成本低、操作简单的五月瓜藤种苗的培养方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：培养步骤依次包括预处理、无菌外植体获得、愈伤组织诱导培养、丛生芽诱导增殖和生根培养及移栽；具体包括以下步骤：

（1）预处理：不同的外植体的类型采用不同的浸泡预处理及冷藏预处理；

（2）无菌外植体获得：对外植体进行消毒灭菌处理获得无菌外植体用于下一步培养；

（3）愈伤组织诱导培养：将步骤（2）中获得的无菌外植体接种至液体浅层愈伤诱导培养基上进行愈伤组织的诱导培养得到状态良好的愈伤组织；

（4）丛生芽诱导增殖：将步骤（3）中获得的良好的愈伤组织接种到固液双层丛生芽培养基上进行丛生芽增殖培养；

（5）生根培养及移栽：将步骤（4）中获得的丛生芽浸泡处理后接种到固体生根培养基上进行生根培养，然后将得到的生根苗炼苗后栽培到基质中进行生长得到五月瓜藤种苗。

采用上述技术方案，通过大量实验证实，该五月瓜藤种苗的培养方法能够实现增殖率高，生物产量大，培养周期短；组培苗质量好，种苗健壮，栽培成活率高。

作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（1）中的所述外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条。。本发明使用的外植体是叶片或叶柄或幼嫩枝条，可以通过多种外植体实现对五月瓜藤种苗的培养，既方便外植体的获得，又节省了材料避免了浪费。

作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（1）中，当所选外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条时，所述预处理的方法是：将所述外植体离体后立即置于添加1~5g/L PVP+1~3g/L Vc的水溶液中进行浸泡处理3~5h，后置于2~8℃条件下保湿冷藏5~10 d。对外植体进行预处理，所采用的预处理方法适合各个外植体的后续培养，且该预处理过程有利于后续的培养，缩短培养周期。

作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（2）中，当所选外植体为叶片或叶柄或幼嫩枝条时，灭菌处理的方式为：将预处理完后的外植体采用75%酒精消毒20~40s后采用升汞灭菌5~10min，然后无菌水冲洗备用。无菌的处理对后续的培养过程是非常关键的，直接影响后续培养的诱导率、增殖率以及生根率，通过大量实验验证，该灭菌方法对后续的培养最好。

作为本发明进一步的改进在于，所述的步骤（3）中所述愈伤组织的诱导培养基的配方为WPM或Ms+1.0~4.0mg/L 2,4-D+0.05~0.5mg/L NAA+0.1~1.5g/L PVP+30 g/L蔗糖，pH5.6~6.0；培养条件为：光照0 h/d，温度25±1℃；所述液体浅层厚度为0.5~3cm。愈伤组织的诱导培养基的组成直接关系到愈伤组织的诱导率以及愈伤组织的质量高低，为了提高五月瓜藤外植体的愈伤组织的诱导率，本发明对五月瓜藤外植体的愈伤组织的诱导培养基进行了优化，通过大量的筛选试验最终确定，采用上述的愈伤组织诱导培养基进行五月瓜藤外植体的愈伤组织诱导培养，愈伤组织的诱导效果最好。