[发明专利]一种附子复方中单酯型生物碱的含量测定方法

权利要求书

1.一种附子复方制剂中单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：用高效液相色谱法测定附子中单酯型生物碱含量，其色谱柱以极性乙醚连接苯基键合硅胶为填充剂。

2.根据权利要求1的一种附子复方制剂中单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：色谱条件与系统适用性试验，以乙腈﹕0.05%~0.2%的磷酸溶液=20~25﹕75~80为流动相，或以乙腈：0.05%~0.2%的磷酸溶液=19~25：81~75为流动相，其中磷酸溶液含0.02%~0.06%三乙胺和0.01%~0.03%二正丁胺；检测波长为222~242nm，理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备：取苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml分别含20~70μg、5~20μg、5~20μg的混合溶液，作为对照品贮备液，精密量取对照品储备液用0.1%磷酸溶液稀释2~10倍，摇匀作为对照品溶液；

固相萃取柱系统适用性试验:精密量取对照品贮备液5ml，室温减压回收至干，精密加入0.1mol/L盐酸50ml使溶解，精密量取10ml，加在固相萃取柱上，以混合型阳离子交换反相吸附剂为填充剂，150-200mg，容量为4-10ml，预先依次用乙腈、水各6ml洗脱，依次以水3ml、1.25%氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml洗脱，待洗脱液流尽后，放置5分钟，继用乙腈：浓氨试液=90：10的混合溶液10ml洗脱，收集洗脱液，于40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入乙腈：0.1%的磷酸溶液=20：80的混合溶液5ml使溶解，滤过，取续滤液作为固相萃取柱系统适用性试验溶液；另精密量取对照品贮备液5ml，用0.1％的磷酸溶液定容至25ml，作为固相萃取柱系统适用性试验用对照品溶液；

分别精密吸取上述系统适用性试验溶液与固相萃取柱系统适用性试验用对照品溶液各10~20μl，注入液相色谱仪，测定，计算系统适用性试验溶液与对照品溶液中各相应成分峰面积的比值，不得小于0.95；

供试品溶液的制备：取检品，称取0.2~2g或量取5~15ml，置具塞锥形瓶中，精密加入0.1mol/L盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理10~50分钟并时时振摇，放冷，再称定重量，用0.1mol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，以每分钟2000~6000转离心10~40分钟，滤过，精密量取续滤液10ml，照固相萃取柱系统适用性试验项下的方法，自“加在固相萃取柱上”起，依法操作，制备供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10~30μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.根据权利要求2的一种附子复方制剂中单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：理论板数按苯甲酰新乌头原碱峰计算应不低于10000。

4.根据权利要求2的一种附子复方制剂中单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：制备供试品溶液时取样量是0.2~2g或5~15ml。

5.根据权利要求2的一种附子复方制剂中单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：供试品溶液的制备过程中，所用固相萃取柱填料为混合型阳离子交换反相吸附剂，规格为150~200mg，容量为4~10ml，并预先依次用乙腈、水各6ml洗脱处理。

6.根据权利要求2的一种附子复方制剂中单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：供试品溶液的制备过程中，固相萃取柱的洗脱过程依次为水3ml，1.25%的氨溶液、水、甲醇、乙腈各5ml，待洗脱液流尽后，放置5分钟，再用乙腈﹕浓氨试液=90﹕10的混合溶液10ml洗脱，收集洗脱液。

7.根据权利要求2的一种附子复方制剂中单酯型生物碱的含量测定方法，其特征在于：固相萃取柱系统适用性试验中试验溶液与对照品溶液中三种单酯型生物碱峰面积的比值不得小于0.95。