[发明专利]一种仿生固定化3-氰基吡啶腈水合酶的制备方法

权利要求书

1.一种仿生固定化3-氰基吡啶腈水合酶的制备方法，其特征在于：采用的是仿生固定化酶，该酶是由黄色短杆菌腈水合酶被氧化铟纳米壳层包埋而成，具体制备方法：

  首先将黄色短杆菌腈水合酶包裹于脂质体纳米微囊中，然后以脂质体纳米微囊为模板在诱导剂偏苯三甲酸的作用下，硝酸铟水解液在脂质体表面脱水形成氧化铟壳层，最后再利用低浓度表面活性剂曲通X-100去除脂质体模板，即可。

2.根据权利要求1所述的一种仿生固定化3-氰基吡啶腈水合酶的制备，其特征是，包括以下步骤：

   （1）脂质体模板的制备：将大豆磷脂和胆固醇加入到乙醇溶液中，超声形成大豆磷脂和胆固醇浓度分别为10~100 g/L和5~50 g/L的均匀体系；旋转蒸发去除乙醇，在反应器上形成均匀透明的薄膜；再加入0.05~50 g/L的黄色短杆菌腈水合酶悬液使薄膜溶解，经超声分散0.5~4 h，得到终浓度为2~26g/L脂质体溶液；

  （2）脂质体微囊的制备：取上述脂质体溶液，在剧烈震荡的情况下缓慢滴加诱导剂偏苯三甲酸，其中偏苯三甲酸浓度为0.05~50 g/L，滴加量为脂质体溶液体积的10~60%；超声5~15 min后，用乙醇-水溶液多次洗涤，除去游离的偏苯三甲酸和未包埋的游离酶；最后加入脂质体溶液体积5~20% 的缓冲溶液，缓冲溶液的pH=7，形成浓度为5~35 g脂质体/L的乳浊液；

  （3）氧化铟壳层的制备：超声下向上述乳浊液中缓慢滴加硝酸铟溶液，滴加量为脂质体溶液体积的20~75%，滴加完毕后30~80℃下搅拌0.5~2 h，然后用乙醇-水溶液多次洗涤，最后离心分离得包覆黄色短杆菌腈水合酶的氧化铟微囊；

 （4）模板去除：将氧化铟纳米微囊加入脂质体溶液体积2~5倍的曲通X-100溶液中，15~40 min后用乙醇-水溶液多次洗涤，然后离心分离，得除去模板后的包覆黄色短杆菌腈水合酶的氧化铟纳米微囊，所述的曲通X-100溶液的质量分数为0.1~2%。

3.根据权利要求2所述的一种仿生固定化3-氰基吡啶腈水合酶的制备方法，其特征是：步骤（3）加入的硝酸铟溶液浓度为0.5~80 mg/L。

4.根据权利要求2所述的一种仿生固定化3-氰基吡啶腈水合酶的制备的方法，其特征是： 所述步骤（2）中pH=7的缓冲溶液选自磷酸氢二钠-柠檬酸、乙酸-乙酸钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠、巴比妥钠-盐酸中的一种。