[发明专利]海参组织蛋白酶的胶原酶解活性检测方法

权利要求书

1.海参组织蛋白酶的胶原酶解活性检测方法，其特征是：采用海参组织蛋白酶对胶原蛋白凝胶表面酶解产生的凹陷直径进行酶解活性评价。

2.根据权利要求1所述的海参组织蛋白酶的胶原酶解活性检测方法，其特征是：所述的检测方法具有如下步骤：

1）胶原蛋白凝胶制作：利用日常生活中常见的富含胶原蛋白食品原料作为制作材料，经过熬制、去脂肪、过滤去杂、pH值调整、固形物测定、倒板凝结步骤处理，制成胶原蛋白凝胶；

2）蛋白酶溶液配制：将蛋白酶标准品以10mg/mL、1mg/mL、0.1mg/mL、0.01mg/mL及0.001mg/mL的浓度进行溶解制备酶液，测试用的海参组织蛋白酶采用所述的蛋白酶标准品配置的浓度之一进行配制；

3）酶解曲线制作：取少量配制完成的标准蛋白酶及海参组织蛋白酶溶液，滴于胶原蛋白凝胶表面；加盖密闭后恒温酶解；迅速将酶解后的平板放入低温环境，待冷却后，快速测量酶解形成圆形凹陷的表面直径，统计分析直径数据，制作酶解曲线；

4）海参组织蛋白酶活性分析：以海参组织蛋白酶酶解形成的凹陷直径数据比对标准蛋白酶酶解数据制作的酶解曲线，查找海参组织蛋白酶对应的标准蛋白酶浓度特征，换算查得海参组织蛋白酶活性相对值。

3.根据权利要求2所述的海参组织蛋白酶的胶原酶解活性检测方法，其特征是：所述的步骤1）中，富含胶原蛋白食品原料选自鱼皮或鸡爪或猪皮；所述熬制过程温度为85-125℃，熬制时间为5-30min，可通过离心及冷冻去除脂肪。

4.根据权利要求2所述的海参组织蛋白酶的胶原酶解活性检测方法，其特征是：所述的步骤1）中，可利用HCl和NaOH等酸碱进行溶液pH值调整，根据不同胶原蛋白原料特性，调整固形物浓度为10-50%，利用常用的盘碟、培养皿等作为倒板器皿。

5.根据权利要求2所述的海参组织蛋白酶的胶原酶解活性检测方法，其特征是：所述的步骤2）中，所使用的蛋白酶一般选择胶原蛋白酶解活性较强的复合酶作为标准品，所配制的酶液需调整pH至酶活性最佳条件，海参组织蛋白酶样品配置的pH一般为3.5-8.5，配制终浓度为1mg/mL。

6.根据权利要求2所述的海参组织蛋白酶的胶原酶解活性检测方法，其特征是：所述的步骤3）中，蛋白酶溶液一般取5-500微升，使用培养皿盖、保鲜膜等封闭蛋白酶液及胶原凝胶，小心转移至水浴锅、恒温培养箱等设备中，保持20-60℃条件酶解10-60min。

7.根据权利要求2所述的海参组织蛋白酶的胶原酶解活性检测方法，其特征是：所述步骤（3）中，酶解结束后应将平板迅速放入零下低温环境，以抑制酶解；之后测量酶解形成圆形凹陷的表面直径，统计分析直径数据，制作酶解曲线。