[发明专利]一种龙眼肉蛋白多糖的检测方法

权利要求书

1.一种龙眼肉蛋白多糖的检测方法，其特征在于，所述的龙眼肉蛋白多糖的检测方法包括：

步骤一、取龙眼干果肉，加蒸馏水进行匀浆处理，龙眼肉匀浆保温浸提后，抽滤分离滤液；滤液浓缩后，转入截留分子量为3500的透析袋中，置于蒸馏水中低温透析；透析袋内溶液真空浓缩后冷冻干燥，得到龙眼粗蛋白多糖粉末；

步骤二、取龙眼粗蛋白多糖溶于蒸馏水中，充分溶解后离心后取上清液加入Sephadex G-100凝胶柱中，并以蒸馏水洗脱，采用苯酚硫酸法测定洗脱液中的多糖含量，测定洗脱液在280nm处的吸光值以表征其蛋白含量，收集合并同时出现多糖和蛋白信号的洗脱液，冷冻干燥得到龙眼肉蛋白多糖的纯品；

步骤三、取龙眼粗蛋白多糖溶于碳酸钠缓冲液中，加入异硫氰酸荧光素，于室温下避光搅拌反应，反应结束后，离心取上清液加入Sephadex G-100凝胶柱中，并以蒸馏水洗脱，采用苯酚硫酸法测定洗脱液中的多糖含量，并分别测定洗脱液在280nm和489.5nm处的吸光值以表征其蛋白和荧光素含量，收集合并同时出现多糖、蛋白和荧光素信号的洗脱液，冷冻干燥得到荧光标记龙眼肉蛋白多糖的纯品；

步骤四、采用硝酸钠溶液配制系列浓度的荧光标记龙眼肉蛋白多糖样液，分别经0.45μm微孔滤膜过滤后采用液相色谱仪结合荧光检测器分析，进行荧光标记龙眼肉蛋白多糖的标准曲线测定；

步骤五、以多糖浓度与峰面积对数对建立标准曲线进行定量分析，以响应峰的保留时间进行分子量的定性分析。

2.如权利要求1所述的龙眼肉蛋白多糖的检测方法，其特征在于，步骤一所述的龙眼肉匀浆在90℃下保温浸提2小时。

3.如权利要求1所述的龙眼肉蛋白多糖的检测方法，其特征在于，步骤一所述的滤液在60℃下真空浓缩后，转入截留分子量为3500的透析袋中，置于大量4℃蒸馏水中低温透析12小时。

4.如权利要求1所述的龙眼肉蛋白多糖的检测方法，其特征在于，在步骤三中，龙眼粗蛋白多糖溶于0.5mol/L的pH为8.3的碳酸钠缓冲液中，加入异硫氰酸荧光素后于室温下避光搅拌反应24小时。

5.如权利要求1所述的龙眼肉蛋白多糖的检测方法，其特征在于，步骤四中采用0.1mol/L的硝酸钠溶液配制系列浓度为0.5–200μg/mL的多糖样液。