[发明专利]一种鉴别牛羊猪源性成分的引物组及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种鉴别牛羊猪源性成分的试剂盒。

背景技术

自古以来“民以食为天”，“食”一直以来是人们日常生活中必不可少的一部分。随着社会经济的发展，肉类及其制品成为人们日常食物的重要来源和组成部分。但是，国内外市场上肉食品安全性事件时有发生，“瘦肉精事件”、“三聚氰胺事件”、“假牛肉事件”和“马肉风波”等食品问题层出不穷，同时带来诸多社会问题。当今，食品的丰富多样化改变了外观和气味，这也给肉类掺假者带来了可乘之机。这些问题不但直接损害了消费者的经济利益，还可能引发一系列社会问题。因此，国家监管部门先后颁布多项法律法规来规范动物性食品销售的多个环节。在技术上，国家质检总局制定了一系列的标准方法用于牛、羊、猪等物种成分的检测，这对打击掺假犯罪起到了一定作用。

早期肉类鉴别依赖于感官和形态学检验，这些检验方法准确性低、局限度大，对于深加工的肉类掺假基本无法鉴别。随后发展了肉类形态学分析和成分鉴定方法，在这个过程中基本确立了以特征性的蛋白和核酸作为靶标物质进行检验的思路。如今形成了蛋白检验和DNA分析两个不同的检测方向，经过20多年的发展，鉴别精度和灵敏度均有极大提高。但是当肉类经过物理处理如切碎、混合、蒸煮和熏烤等过程后失去了原有形态和质地，蛋白质鉴定技术不能满足对这些样品检测的需要。因此，有必要提供一种简便易行、准确度更高的检测方法来检测肉类成分。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴别牛羊猪源性成分的引物组，包含有如下的引物：

牛羊猪通用下游引物Seq1：

TGGCTGGCACGAGATTTA(SEQ ID NO:1)、

牛羊通用上游引物Seq2：

GCTGGACTTAACTGCATC(SEQ ID NO:2)、

猪特异性上游引物Seq3：

ACGCCAATCTACCACAAA(SEQ ID NO:3)。

为了提高检测的特异性，对上述的牛羊通用上游引物Seq2进行了优化，优化后的引物信息如下：

牛羊通用上游引物Seq2优选1：GCTGGACTTAACTGCAGC(SEQ ID NO:4)、

牛羊通用上游引物Seq2优选2：GCTGGACTTAACTGCCTC(SEQ ID NO:5)。

上述的引物组，扩增的牛、羊、猪源性成分的扩增的片段大小分别为549bp、570bp和420bp。

本发明还提供一种鉴别牛羊猪源性成分的试剂盒，使用上述的引物组；

所述的试剂盒，还包含有如下的组分：

PCR Buffer A液：含有100pM dNTP、2.0mM MgCl₂、1×PCR buffer、50U/L Taq聚合酶、0.6μM牛羊猪通用下游引物Seq1、0.3μM牛羊通用上游引物Seq2、0.3μM猪特异性上游引物Seq3和双蒸水；

Positive B液：含有阳性DNA模板(总浓度50ng/μL，等比混合牛、猪和绵羊基因组DNA。

Negative C液：蒸馏水。

本发明与现有技术相比，可以在一次PCR反应中检测牛、羊、猪三个物种，且具有很高的稳定性和灵敏性。相对更为复杂的多重PCR技术，三引物PCR在一定程度上减少了误差，更为重要的是一次PCR就可以鉴定猪牛羊三个物种，省时省力。本发明基于PCR技术平台，对实验室设备要求不高，适于基层单位应用。

附图说明

图1：是本发明对牛羊猪样品的检测结果。以中国荷斯坦牛、湖羊、美利奴羊、太湖猪、长白猪的DNA为模板，扩增测试所有待检样品扩增性良好，混合样品提取的DNA也完全达到一致效果。图中泳道编号备注如下：1：DNA Marker；2:牛；3：羊；4：猪；5：牛羊猪；6：牛羊；7：阴性对照。

具体实施方式：

本发明经过对猪、牛、羊及常见物种的mtDNA全序列做精细对比，以包含物种特异性序列两端的保守区为引物设计区域，扩增区域序列由于存在插入-缺失片段而产物大小不同，可在一步PCR中同时鉴定不同的物种，提高检测效率。

应当说明的是，本方法以绵羊基因组为参照设计完成，对山羊宜使用，具有与绵羊源性成分同等检测效果，但对山羊基因组扩增产物长度为575bp。