[发明专利]一种纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰的PSA传感器制备方法及应用

权利要求书

1.一种花状纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰生物构建的PSA传感器制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的三氧化二铝抛光粉对玻碳电极抛光处理，用超纯水清洗干净，然后将电极置于5 mmol/L铁氰化钾溶液中，在-0.2~0.6 V电位下扫描，使峰电位差小于110 mV；

（2）以质量分数为1%、2 mL的HPtCl₄为底液，在电压为-0.2V下扫描30s，得到电沉积Pt纳米粒子的电极；

（3）滴加6 μL、5~10 μg/mL的前列腺特异性抗原PSA捕获抗体Ab₁，4℃下晾干，超纯水冲洗；

（4）滴加3 μL、质量分数为5~15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液至电极表面，4℃下晾干，超纯水冲洗；

（5）滴加6 μL浓度为0.0005~20 ng/mL的前列腺特异性抗原PSA溶液至电极表面，4℃下晾干，超纯水冲洗；

（6）继续滴加4~6 μL检测抗体孵化物—花状纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰-Ab₂溶液至电极表面，置于4℃冰箱中孵化1 h，清洗后，晾干，制得一种花状纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰生物构建的PSA传感器。

2.如权利要求1所述的一种花状纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰生物构建的PSA传感器制备方法，所述检测抗体孵化物—花状纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰-Ab₂溶液的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰的制备

将0.5~2.0 g葡萄糖加入到30~80 mL、0.60 mol/L的Mn(NO₃)₂溶液中，10 min后移入到高压反应釜中，180℃下反应18 h，冷却至室温，离心、用乙醇和超纯水洗涤，80℃干燥后得到前驱体，随后550℃下高温煅烧3 h制得三氧化二锰；

取0.05~1.5 g三氧化二锰置于三口烧瓶中，加入0.1~3 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷和10 mL无水乙醇，加热到80℃并保持5~10 h，冷却到室温，所得混合物经洗涤、离心分离、45℃下真空干燥，即制得3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰；

（2）花状纳米金钯的制备

将1 mL含有2~8 mmol/L HAuCl₄和2~8 mmol/L K₂PdCl₄的水溶液加到47 mL超纯水中，加入0.5~2 mL、0.1 mol/L柠檬酸钠15 s后，在搅拌下，将0.5~2 mL、5 mg/mL PVP逐滴加入，搅拌30 min，将混合物离心、洗涤后重新分散到超纯水中，制得花状纳米金钯的溶液；

（3）检测抗体标记物—花状纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰的制备

分别将10~30 mg的3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰分散到5~100 mL的花状纳米金钯的溶液中，室温下震荡12 h；混合物经洗涤、离心分离、35℃下真空干燥，制得花状纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰；

（4）检测抗体孵化物—花状纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰-Ab₂溶液的制备

将1~3 mg的花状纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰分散于1 mL超纯水中，加入1 mL、5~12 μg/mL的检测抗体溶液，在4℃下振荡孵化12 h，离心分离，将下层沉淀分散于1 mL、1/15 mol/L 的pH=7.4磷酸盐缓冲溶液中，制得检测抗体孵化物—花状纳米金钯/3-氨丙基三乙氧基硅烷化三氧化二锰-Ab₂溶液，4℃下保存备用。

3.如权利要求1所述的制备方法制备的免疫传感器用于前列腺特异性抗原PSA的检测方法，其特征在于，包括以下分析步骤：

（1）采用三电极体系进行测定，将权利要求1所制备的免疫传感器作为工作电极，饱和甘汞电极为对电极，铂丝电极为辅助电极，在pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液中，采用时间-电流的方法进行扫描，输入电压为-0.4 V，运行时间400 s；

（2）当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL、pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液中注入10 μL、5 mol/L的双氧水溶液，记录电流变化，根据所得电流差值与前列腺特异性抗原PSA的浓度成线性关系，绘制工作曲线；

（3）依据工作曲线的绘制进行样品中前列腺特异性抗原PSA的检测，检测的结果可以在工作曲线的查得。