[发明专利]一种人类多肽在制备提高调节性T细胞数量的免疫调节剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及人类多肽，具体是一种人类多肽在制备提高调节性T细胞数量的免疫调节剂中的应用。

背景技术

β-淀粉样变多肽(β-amyloid peptide，Aβ)分子量约4kDa，由β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)水解而来，由细胞分泌，在细胞基质沉淀聚积后具有很强的神经毒性作用。Aβ经β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用而产生的含有39～43个氨基酸的多肽。它可由多种细胞产生，循环于血液、脑脊液和脑间质液中，大多与伴侣蛋白分子结合，少数以游离状态存在。人体内Aβ最常见的亚型是Aβ_1-40和Aβ_1-42。在人脑脊液和血中，Aβ_1-40分别比Aβ_1-42的含量水平高10倍和1.5倍。Aβ的沉积不仅与神经元的退行性病变有关，是阿尔兹海默病人脑内老年斑周边神经元变性的主要特征。

Aβ的神经毒性作用在阿尔茨海默病的病程进展中发挥着主要作用。将Aβ注入大鼠或猴的大脑皮质中，发现注射部位发生组织坏死，周围神经元缺失及神经角质增生，并与剂量有明显的相关性。Aβ对神经系统的毒性作用是使血管壁淀粉样变直接导致血管硬化，弹性变差，甚至容易破裂或形成血栓，还诱使神经细胞过早凋亡。动物实验显示，Aβ对神经元的作用与其状态有关。溶解状态的Aβ在短时间内可促使神经突生长，提高神经元的存活率，而沉积状态的Aβ对神经元呈现相反的作用，引起与阿尔茨海默病相似的病理变化，即神经突退缩和神经元变性，最显著地改变发生在衰老的哺乳类动物大脑。

Aβ对血管形态及血管功能也具有一定的影响。首先沉积在血管外层基膜，减少了小动脉平滑肌细胞与基膜的黏附，血管中层被其取代，平滑肌细胞发生变性。研究发现Aβ沉积在毛细血管基膜，并呈板状突入神经毡。Aβ促使血管周围纤维沉积，导致了淀粉样血管病。

目前大多数研究都将Aβ定位成阿尔兹海默病的特征性多肽，关于其正常生理功能及机制研究甚少。尽管有研究显示，缺少Aβ不会导致任何生理功能的丧失，但不少研究也证明Aβ具有几个潜在的功能，包括活化某些激酶、防止氧化应激、调节胆固醇运输、充当转录因子及促发炎症。

在细胞水平研究Aβ的病理生理学特性过程中，我们意外发现Aβ具有一定免疫调节功能，能有效诱导Treg细胞形成，进而调节免疫因子分泌。目前治疗自身免疫性疾病主要以免疫抑制剂、细胞因子、特异性抗原抗体等为主，利用人类多肽来诱导Treg细胞介导免疫抑制，从而改善自身免疫性疾病的相关研究较少。值得关注的是，国内外目前还未见有关Aβ能诱导Treg细胞并具免疫调节作用的报道。

发明内容

本发明的目的是将人类多肽(Aβ)应用于制备免疫调节剂，用于提高体内调节性T细胞相对数量，以供自身免疫疾病、组织器官移植、GVHR或炎症疾病使用。

实现本发明目的的技术方案是：

一种人类多肽在制备提高调节性T细胞数量的免疫调节剂中的应用，将全长只有40个氨基酸，序列为DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV的人类多肽制成浓度为1-1000nmol/L的溶液，用于诱导人外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)转化为CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞，干预自身免疫性疾病，可应用于防治自身免疫性Ⅰ型糖尿病。

经实验表明，上述的人类多肽体外预处理人外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，显著增加了CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的构成比，能诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞，具有增强CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞抑制效应的作用，可以制成作为增强CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞抑制效应的免疫调节剂，以干预自身免疫性疾病。

本发明所述的人类多肽为全长肽Aβ_1-40，由美国康乃狄格州纽黑文市耶鲁大学凯克生物技术中心(Keck Biotechnology Center,Yale University,New Haven,CT)提供。使用时需配制成新鲜的Aβ溶液。

所述Aβ溶液的配制，包括如下步骤：

1.1人类多肽(Aβ)的氨基酸序列:

DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV。

1.2 Aβ合成与纯化