[发明专利]一种用于检测沙门氏菌的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测沙门氏菌的试剂盒及其检测方法。

背景技术

人畜共患病是指由同一种病原体引起，流行病学上相互关联，在人类和动物之间自然传播的疫病。其病原包括病毒、细菌、支原体、螺旋体、立克次氏体、衣原体、真菌、寄生虫等。这类疾病的特性在于很不容易消灭。因此这些病原微生物的存在会对人类健康、畜牧业安全生产、畜产品安全和公共卫生造成重大危害，从而造成巨大的经济损失。在实验室研究方面，携带或者潜在携带病原微生物的动物会对后续科学实验产生较大的影响，因此对于病原微生物的检测就变得尤为重要。

目前检测人畜共患病原微生物的方法还是主要集中在传统的生化方法和基于抗原抗体的免疫学方法，这些方法的检验程序十分复杂繁琐，且耗时较长，并且部分检验过程及结果判定需要操作人员的主观判断，因此新的试剂盒和检测方法的引入就势在必行。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种用于检测沙门氏菌的试剂盒及其检测方法。

所述的一种用于检测沙门氏菌的试剂盒，其特征在于包括引物FP和引物RP，所述引物FP的核苷酸序列如SEQ ID NO：1 所示，所述的引物RP的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

所述的一种用于检测沙门氏菌的试剂盒，其特征在于所述的引物FP含量为2.5ul，所述引物RP含量2.5ul。

所述的利用试剂盒进行沙门氏菌检测的方法，其特征在于包括以下步骤：以检测样品的DNA 为模板，以引物组FP和引物RP进行PCR 扩增，当扩增产物在456bp 处出现一条特异性核酸带时，判断为样品中含有沙门氏菌DNA。

所述的方法，其特征在于PCR体系中含有检测样品的DNA 150 ng、引物FP2.5ul、引物RP2.5ul、Taq酶12.5ul、ddH2O补足25 ul。

所述的方法，其特征在于PCR反应条件： 98℃预变性30s，98℃变性10 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸45s，循环35次，最后72 ℃总延伸10 min。

本发明的有益效果：本发明通过特异引物的设计，采用高通量测序的方法，可实现多至5000份样本中各种病原菌或病毒的一次性快速检测，实现24-48小时内致病源的确诊；不仅可发现各种病原菌或病毒的变异程度，更能判别其传染性，为后续的公共卫生防疫及政府决策提供依据。

附图说明

图1 gyrB基因通用引物引物测试电泳结果图；

图2优化引物结构组成图；

图3沙门氏菌模板浓度梯度实验电泳结果图。

具体实施方式

为了使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按常规实验方法进行。

实施例

1 研究对象

小鼠，包括经病原微生物感染小鼠及正常健康小鼠。

2 研究范围

2.1 沙门氏菌

表1 本研究用沙门氏菌菌种基本信息