[发明专利]一种制备血吸虫尾蚴稀土上转换荧光标记物的方法

权利要求书

1.一种制备血吸虫尾蚴稀土上转换荧光标记物的方法，其特征在于，包括以下工序：

1）将稀土硝酸盐与油酸反应，获得稀土上转换荧光纳米颗粒UCs-OA；

2）将纳米颗粒UCs-OA与间氯苯甲酸反应，获得环氧化稀土上转换荧光纳米颗粒UCs-EOA；

3）将纳米颗粒UCs-EOA与PEG氯硝柳胺反应，获得载药稀土上转换荧光纳米颗粒UCs-Ni；

4）利用原子力显微镜和透射电子显微镜测试纳米颗粒UCs-Ni的表面微观结构；

5）利用荧光光谱仪测试纳米颗粒UCs-Ni的荧光发射光谱；

6）利用共聚焦荧光显微镜测试纳米颗粒UCs-Ni的KB细胞荧光成像；

7）利用共聚焦荧光显微镜测试纳米颗粒UCs-Ni的血吸虫尾蚴荧光成像。

2.根据权利要求1所述的一种制备血吸虫尾蚴稀土上转换荧光标记物的方法，其特征在于，在所述工序1）中，所述纳米颗粒UCs-OA的制备方法包括如下步骤：

a）将NaOH，水，乙醇，油酸在搅拌下进行混合，形成均匀的溶液；

b）将稀土硝酸盐水溶液、NH₄F水溶液依次慢慢滴加到步骤a）得到的溶液中，并拌8-11分钟，得到混合物；

c）将步骤b）得到的混合液转移至高压反应釜，将该体系在155°-167°维持7.5小时并冷却至室温，得到混合物；

d）将环己烷加入步骤c）得到的混合物，得到混合液；

e）将乙醇加入步骤d）得到的混合物并离心，得到粉末状样品；

f）用乙醇和水依次洗涤步骤e）得到的粉末状样品，并离心得到纳米颗粒UCs-OA；

在所述工序2）中，所述纳米颗粒UCs-EOA的制备方法包括如下步骤：

a）将所述纳米颗粒UCs-OA、环己烷、CH₂Cl₂、间氯苯甲酸充分混合并加热回流3-4小时；

b）将步骤a）得到的溶液冷却至室温，得到纳米颗粒UCs-EOA；

在所述工序3）中，所述纳米颗粒UCs-Ni的制备方法包括如下步骤：

a）将PEG氯硝柳胺加入所述纳米颗粒UCs-EOA，在室温下搅拌6-8小时得到混合液；

b）将步骤a）得到的混合液离心，得到粉末状样品；

c）用乙醇和水依次将将步骤b）得到的粉末状样品洗涤三次，得到产物纳米颗粒UCs-Ni；

在所述工序4）中，所述纳米颗粒UCs-Ni的表面微观结构测试方法包括如下步骤：

a）将所述纳米颗粒UCs-Ni制成100 μg / mL溶液；

b）将10 μl a）中所述的纳米颗粒UCs-Ni溶液滴加在以铁片为基底的新剥离云母片上，自然晾干，得到样品；

c）将b）中所述的样品在原子力显微镜中进行测试；

d）将10 μl a）中所述的纳米颗粒UCs-Ni溶液滴加在铜网格上，自然晾干，得到样品；

e）将d）中所述的样品在透射电子显微镜中进行测试；

在所述工序5）中，纳米颗粒UCs-Ni的荧光发射光谱测试方法包括如下步骤：

i）将纳米颗粒UCs-Ni制成100 μg / mL溶液；

ii）将i）中纳米颗粒UCs-Ni溶液放入标准的石英池中，在荧光光谱仪中进行测试，通过测试反映纳米颗粒UCs-Ni在激发光下荧光发射强度，所述荧光光谱仪为Edinburgh LFS 920；所述石英池子长度为1 cm；测量条件为：试时激发光波长为400 nm，使用时间驱动模式，光谱的带宽设置为1 nm，狭缝宽度为2.5 nm，光散射的强度值为测试15s中强度的平均值，整体测试使用衰减模式；

在所述工序6）中，所述共聚焦荧光显微镜测试纳米颗粒UCs-Ni的KB细胞荧光成像方法包括如下步骤：

a) 将所述纳米颗粒UCs-Ni制成100 μg / mL溶液；

b）将KB细胞用a）中所述的含100 μg / mL纳米颗粒UCs-Ni的培养基溶液在3 % CO₂，97 %空气，温度为36°C的环境下孵育10 min，利用共聚焦荧光显微镜测试KB细胞样品的荧光成像，通过KB细胞的荧光成像来判断化合物NI-3的生物相容性、细胞穿透性；

在所述工序7）中，所述共聚焦荧光显微镜测试纳米颗粒UCs-Ni的血吸虫尾蚴荧光成像方法包括如下步骤：

i ) 将所述纳米颗粒UCs-Ni制成100 μg / mL溶液；

ii）将活性的血吸虫尾蚴移入i）中所述的含100 μg / mL纳米颗粒UCs-Ni的培养基溶液中培养，利用共聚焦荧光显微镜测试血吸虫尾蚴样品的荧光成像。