[发明专利]一种直接实时荧光定量PCR的方法有效
| 申请号： | 201510249614.8 | 申请日： | 2015-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN104818338B | 公开（公告）日： | 2018-02-23 |
| 发明（设计）人： | 王海滨;周其玲;冯小霞;陈厦;王棽;刘立明;李永利;马洪滨;王雪飞;高志强;王嫣 | 申请（专利权）人： | 王海滨 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京正理专利代理有限公司11257 | 代理人： | 赵晓丹 |
| 地址： | 100039 北京市丰台*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 直接 实时 荧光 定量 pcr 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种非诊断目的的直接实时荧光定量PCR的方法，其特征在于包括如下步骤：
1)用熔点为58℃～60℃的石蜡油混合物包被聚苯乙烯微球，并置于PCR扩增管管底；所述石蜡油混合物包括石蜡油和树脂；
2)混合热启动DNA聚合酶、引物和探针、pH值3.5～4.5乙酸缓冲液、氯化镁、氯化钾和dNTP即制得荧光PCR扩增试剂；
3)用所述石蜡油混合物封闭所述荧光PCR扩增试剂于步骤1)的PCR扩增管管底；
4)石蜡油混合物冷凝后，加入核酸裂解试剂；
5)检测样品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述聚苯乙烯微球直径为1-2mm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述树脂为安息香。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述热启动DNA聚合酶为热启动Taq DNA聚合酶。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述核酸裂解试剂包括0.25N的氢氧化钠和1％曲通X-100。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：每个PCR管中聚苯乙烯微球的数量为5-25个。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：每个PCR管中聚苯乙烯微球的数量为8-15个。
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