[发明专利]一株猪肺炎支原体菌种及其应用

说明书

技术领域 本发明涉及一株猪肺炎支原体菌种及其应用，属于兽医微生物学领域。

背景技术

猪支原体肺炎又称猪喘气病，是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)引起的一种猪的接触性慢性呼吸道疾病，呈世界普遍流行。据资料报道，世界各地分离的猪肺炎支原体均属于同一血清型，但不同分离株之间基因组间有较大差异。1992年Frey等(Frey,J.,Haldimann,A.&Nicolet,J.(1992).Chromosomal heterogeneity of various Mycoplasma hyopneumoniae field strains.Int J Syst Bacteriol42,275-280)首次证实了猪肺炎支原体不同分离株间基因组的差异，Artiushin和Minion(1996年)(Artiushin,S.&Minion,F.C.(1996).Arbitrarily primed PCR analysis of Mycoplasma hyopneumoniae field isolates demonstrates genetic heterogeneity.Int J Syst Bacteriol 46,324-328.)进一步证实了Frey的观点，Kokotovic等(1999年)(Kokotovic,B.,Friis,N.F.,Jensen,J.S.&Ahrens,P.(1999).Amplified-fragment length polymorphism fingerprinting of Mycoplasma species.J Clin Microbiol 37,3300-3307.)的研究结果也得出了同样的结论。

支原体是可以自我复制的最小原核生物，生长缓慢，对培养基的要求较高。与其他普通支原体相比，Mhp生长更为缓慢，对体外培养的要求显得更苛刻，被称为“挑剔的微生物”。国内外专家学者通过长期研究，研制了多种类型的营养培养基用于Mhp的分离、培养，如A26支原体体形培养基、KM2培养基、Friis培养基和牛心汤培养基等。不过，这些培养依然存在或多或少的不足，培养效果仍然不能令人满意。因此分离出抗原性、免疫原性好的疫苗株具有十分重要的意义。

猪肺炎支原体基因组含有稀有密码子，至今被鉴定的抗原蛋白只有少数几种。目前认为猪肺炎支原体的主要抗原蛋白有P97、P65、P46、P36等，其中P46是Mhp具有很强种属特异性的膜蛋白，其能够引起机体早期免疫反应。1995年，Futo等(Futo,S.,Seto,Y.,Mitsuse,S.,Mori,Y.,Suzuki,T.&Kawai,K.(1995).Molecular cloning of a 46-kilodalton surface antigen(P46)gene from Mycoplasma hyopneumoniae:direct evidence of CGG codon usage for arginine.JBacteriol 177,1915-1917.)发现P46基因(1257bp)，在其ORF中包含1个CGG(在Mhp中编码精氨酸，在其他支原体中为无义密码子)和3个TGA密码子(在支原体中编码色氨酸，在通用密码子中为终止密码子)。P97是Mhp的主要粘附因子，不同的毒株其R1区包含不同个数的AAKPV/E基元(Hsu,T.,Artiushin,S.&Minion,F.C.(1997).Cloning and functional analysis of the P97swine cilium adhesin gene of Mycoplasma hyopneumoniae.JBacteriol 179,1317-1323)。因此P46蛋白和P97蛋白基因组的序列测定，可作为猪肺炎支原体不同毒株鉴定的分子生物学标记。

发明内容

本发明的目的是提供一株猪肺炎支原体菌种，该菌株在无细胞培养基上生长良好，而且免疫原性强。经猪肺炎支原体16s RNA特异性引物鉴定为猪肺炎支原体菌株，将其命名为猪肺炎支原体S株，经猪肺炎支原体P46引物和P97R1引物特异性扩增后也再次鉴定为猪肺炎支原体，其碱基和氨基酸序列与其他猪肺炎支原体菌株如232株和JN F65株在某些位置不同，可为该菌株的分子生物学鉴定做分子标记；该菌株可用于制备猪支原体灭活疫苗。

本发明的技术方案