[发明专利]一组核苷酸序列及在嗜水气单胞菌鉴定中的应用

权利要求书

1.一组用于交叉恒温扩增技术的核苷酸序列，所述序列由一条交叉引物、两条扩增引物和两条置换引物组成，所述交叉引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示，所述两条扩增引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示，所述两条置换引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：5所示。

2.一种基于非诊断目的的应用权利要求1所述序列进行交叉恒温扩增的方法，所述方法包括如下步骤：

（1） 将待检测样本、权利要求1所述的5种序列、dNTP、Bst DNA 聚合酶、MgSO₄、甜菜碱以及交叉恒温扩增缓冲液加入到反应容器中；

（2）将步骤（1）所得的混合液放置于62～66℃之间的温度环境中进行DNA扩增反应；

（3）检测步骤（2）获得的产物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述待检测样本为DNA提取物。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤（1）的反应容器中的所述置换引物的浓度为0.3 mM，所述交叉引物的浓度为2.4 mM，所述扩增引物的浓度为1.44 mM。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的温度环境为65℃。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的DNA扩增反应时间为1小时。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述的检测方法为电泳检测法、浊度检测法、或染色检测法。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述染色检测使用的染料为Loopamp荧光染料 FD。

9.一种用于检测嗜水气单胞菌的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述的5种序列作为引物、dNTP、Bst DNA聚合酶、甜菜碱、MgSO₄、以及恒温扩增缓冲液。