[发明专利]一种阿兹海默病的生物标记检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种阿兹海默病的生物标记检测方法。

背景技术

老年痴呆大致可分为早老性痴呆(阿兹海默病,AD)和血管性痴呆(vascular dementia,VD)和二者混合型。AD更常见，也研究得更多。该病可能是一组异质性疾病，在多种因素(包括生物和社会心理因素)的作用下才发病。从目前研究来看，该病的可能因素和假说多达30余种，如家族史、女性、头部外伤、低教育水平、甲状腺病、母育龄过高或过低、病毒感染等。

老年痴呆是目前世界性的医疗护理难题，其发病机理非常复杂，病因至今尚未清楚，包括多种假说，如神经递质缺陷、炎症、自由基损伤、淀粉样蛋白、神经毒作用、激素缺乏、细胞凋亡等。正是由于其发病机理的不确定性，所以到目前为止，对于老年痴呆的治疗尚没有确实有效的方法。更多的时候，在患者确诊为老年痴呆后，治疗手段局限于稳定病情，减缓病情的恶化。

显然，对于阿兹海默病的检测，有着非常重要的社会意义，越早检查出病患，越早介入治疗，无论对于患者还是患者家属，都起到了积极作用。传统的阿兹海默病检测一般为脑电图，脑CT以及躯体检验，更多的需要医生依靠经验进行主观判断。

发明内容

本发明的目的是提供一种定量检测阿兹海默病的生物标记检测方法。

实现本发明目的的技术方案是一种阿兹海默病的生物标记检测方法，包括下列步骤：(1)收集处理血清样品；(2)通过基于DNA测序仪的荧光辅助糖电泳DSA-FACE技术荧光标记血清样品中糖蛋白的寡糖链；(3)电泳分离测量样本中已荧光标记的寡糖链的含量并获取寡糖链指纹图谱；(4)分析寡糖链指纹图谱。

优选的步骤(1)中血清样品来自48位阿兹海默患者、31位非阿兹海默痴呆患者去唾液酸的血清及154位健康捐献者的血清。

优选的步骤(3)中测量样本划分为年龄控制组即99位不大于60岁和55位大于60岁，以及痴呆组79位即阿兹海默患者和非阿兹海默痴呆患者的总和，具体为24位男性和24位女性的阿兹海默患者以及18位男性和13位女性的非阿兹海默痴呆患者。

优选的步骤(4)中寡糖链指纹对应N糖链，血清样品被检测的N糖链以峰高显示为峰1-9，通过量化计算图谱中的峰，在同年龄的痴呆组中，其寡糖链的含量值高于同龄的健康组；寡糖链结构相对浓度的峰的大小显示阿兹海默患者和非阿兹海默痴呆患者峰值比年龄控制组的显著较高，在女性患者群中更显著。

本发明具有积极的效果：通过检测血清样品糖组中糖蛋白改变为技术依据，检测寡糖图谱在老年痴呆组血清中的变化，寡糖链指纹图谱可作定量检测阿兹海默病的指标，对其发病的程度进行定量评估检测；操作方便，适用于各种大小分析化学和生物实验室，也适用于大通量大规模的测试。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下面根据具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中

图1为寡糖链指纹对应N糖链结构图；

图2为年龄控制组和痴呆组的血清样品总N链中被检测的N糖链峰图，垂直轴代表总N糖链峰高百分比平均值的95％的置信区间；

图3为血清样品9号总峰的N糖链，垂直轴代表总N糖链峰高百分比平均值的95％的置信区间；

图4为9号总峰在年龄控制组中识别出痴呆患者的特异性和灵敏度工作特性曲线；

图5为血清样品6号总峰的N糖链，垂直轴代表总N糖链峰高百分比平均值的95％的置信区间；

图6为6号总峰在年龄控制组和非阿兹海默痴呆患者中识别出阿兹海默痴呆患者的特异性和灵敏度工作特性曲线。

具体实施方式

研究对象的分类：

病人的人口统计、主要临床和神经病理学数据总结在表1中。脑脊液临床诊断取样于48位阿兹海默症患者(24位男性，24位女性)，还包括额颞叶痴呆、血管性痴呆、路易体痴呆患者们组成一组(18位男性，13位女性)。

表1临床和神经病理学数据

我们用DNA测序仪ABI3130，通过DSA-FACE技术从48位阿兹海默患者及31位非阿兹海默痴呆患者去唾液酸的血清样品中得到N糖组谱，还分析了154位健康捐献者的血清样品。

见图1：显示了寡糖链指纹对应N糖链结构，麦芽低聚糖在顶部显示作为糖质量参考，这些结构中的葡萄糖单元(聚合度)已经被显示，一个典型的去唾液酸N糖谱已经包含了全部的血清蛋白。