[发明专利]一种从木蝴蝶中提取、分离纯化2种黄酮苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及木蝴蝶提取、分离纯化黄酮苷技术领域，具体是一种从木蝴蝶中提取、分离纯化2种黄酮苷的方法。

背景技术

木蝴蝶为紫葳科植物木蝴蝶Oroxylum indicum(L.)Vent.的成熟种子，味苦、甘，性凉，入肺、肝、胃经，有清肺利咽、止咳、舒肝和胃、止痛及清热的作用。临床上用于治疗以咳嗽为主症的上呼吸道感染、急性支气管炎、咽炎、肺炎、百日咳及声带疾患。药理研究表明，黄酮为木蝴蝶的主要活性成分，也是木蝴蝶及其相关制剂质量控制的主要指标。据文献报道，分离纯化木蝴蝶种黄酮苷的方法主要有反复硅胶柱层析法及高速逆流色谱法，硅胶柱层析法的操作过程繁琐，回收率较低，经常使用氯仿、苯等毒性较强的有机溶剂；在高速逆流色谱法中溶剂系统的选择比较困难，缺乏理论指导。因此，建立一种高效快速的提取、分离纯化木蝴蝶中黄酮苷的方法对于深化木蝴蝶的药理研究及完善质量控制体系等具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从木蝴蝶中提取、分离纯化2种黄酮苷的方法，高效、快速、简便。

本发明是以如下技术方案实现的：一种从木蝴蝶中提取、分离纯化2种黄酮苷的方法,具体步骤如下：

(1)木蝴蝶中黄酮苷的提取：将木蝴蝶药材粉碎，用有机溶剂进行提取，过滤，提取液经减压浓缩得粗提物，有机溶剂的用量是木蝴蝶药材用量的6～20倍；

(2)木蝴蝶中黄酮苷的分离分析：用分析型高效液相色谱仪对步骤(1)中粗提物的组成进行分离分析，流动相为甲醇-水，甲醇与水的体积比45:55，流速为1.0mL/min；

(3)木蝴蝶中黄酮苷的分离纯化：用半制备型高效液相色谱仪对步骤1中得到的粗提物中的成分进行分离纯化，流动相为甲醇-水，甲醇与水的体积比50:50，流速为20～30mL/min；根据色谱图手动收集目标组分馏分，减压浓缩除去溶剂；

(4)化合物的纯度检测及结构鉴定：将每一个目标组分馏分减压浓缩后用甲醇溶解，其纯度用高效液相色谱法进行检测，色谱条件见步骤(2)，2种化合物的纯度都达到了98％以上，经核磁共振波谱分析2种化合物分别是黄芩素-7-O-双葡萄糖苷和黄芩素-7-O-葡萄糖苷。

其进一步是：步骤(2)分析型高效液相色谱仪中的色谱柱采用分析型C₁₈柱，检测波长为220nm，柱温为室温。

步骤(3)中半制备型高效液相色谱仪中的色谱柱采用半制备型C₁₈柱，检测波长为220nm，柱温为室温。

步骤(1)提取方法为冷浸、超声或加热回流。。

步骤(1)有机溶剂为甲醇或水或50％乙醇或70％乙醇或95％乙醇。

步骤(1)提取次数为2-5次；提取时间为1-3小时。

步骤(1)提取次数为3次；提取时间为2小时。

步骤(2)中分离分析用甲醇-水洗脱液进行洗脱，洗脱方式为40％甲醇-水等度洗脱或45％甲醇-水等度洗脱或50％甲醇-水等度洗脱。

步骤(3)分离纯化用甲醇-水洗脱液进行洗脱，洗脱方式有甲醇-水梯度洗脱或45％甲醇-水等度洗脱或50％甲醇-水等度洗脱或55％甲醇-水等度洗脱。

本发明的有益效果是：高效、快速从木蝴蝶中提取黄芩素-7-O-双葡萄糖苷和黄芩素-7-O-葡萄糖苷，2种化合物的纯度都达到了98％以上；工艺过程绿色环保，对环境无严重危害，综合成本低。

附图说明

图1是木蝴蝶粗提物的分析型高效液相色谱图；

图2是木蝴蝶粗提物的半制备型高效液相色谱图；

图3是黄芩素-7-O-双葡萄糖苷的高效液相色谱图及紫外光谱图；

图4是黄芩素-7-O-葡萄糖苷的高效液相色谱图及紫外光谱图；

具体实施方式

下面结合实施例和附图详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。实施例中所用设备或原料皆可从市场获得。所用试剂均购自天津市化学试剂三厂，所用水为去离子水。

从木蝴蝶中提取、分离纯化2种黄酮苷的方法，其步骤为：

(1)木蝴蝶中黄酮苷的提取：将木蝴蝶药材粉碎，用15倍量70％乙醇加热回流提取3次，每次2h，过滤，将提取液合并，减压浓缩得粗提物。